METHOD FOR PREPARING CELLULAR SPHEROID AND METHOD FOR PRODUCING EXTRACELLULAR VESICLES BY USING CELLULAR SPHEROID PREPARED BY SUCH METHOD

The present invention relates to a method for producing extracellular vesicles by using cellular spheroids, wherein droplets including a heat-sensitive hydrogel, an ionic solution, and cells are dispensed into an ionic crosslinked hydrogel to form core-shell structures, and the cellular spheroids are prepared inside the structure. The method comprises: a step of preparing a first composition containing a heat-sensitive hydrogel dissolved in an ionic solution, and cells; a dispensing step of discharging the first composition into a second hydrogel; a step of forming core-shell structures by allowing a second hydrogel to react with the ion solution, along the outer circumferences of drops of the first composition discharged into the second hydrogel, to form crosslinked hydrogel films; a step of changing temperatures so as for the heat-sensitive hydrogel within the crosslinked hydrogel film to convert from the gel phase to a liquid phase; and allowing the cells to settle and aggregate into cellular spheroids as the inside of the crosslinked hydrogel film is converted into a liquid phase, whereby the cellular spheroids thus prepared can be utilized for producing extracellular vesicles. La présente invention concerne un procédé de production de vésicules extracellulaires à l'aide de sphéroïdes cellulaires, des gouttelettes comprenant un hydrogel thermosensible, une solution ionique et des cellules étant distribuées dans un hydrogel réticulé ionique pour former des structures noyau-enveloppe, et les sphéroïdes cellulaires étant préparés à l'intérieur de la structure. Le procédé comprend les étapes suivantes : une étape de préparation d'une première composition contenant un hydrogel thermosensible dissous dans une solution ionique, et des cellules : une étape de préparation d'une première composition contenant un hydrogel thermosensible dissous dans une solution ionique, et des cellules ; une étape de distribution consistant à décharger la première composition dans un second hydrogel ; une étape de formation de structures noyau-enveloppe en permettant à un second hydrogel de réagir avec la solution ionique, le long des circonférences extérieures des gouttes de la première composition déchargée dans le second hydrogel, pour former des films d'hydrogel réticulé ; une étape consistant à changer les températures de façon à ce que l'hydrogel thermosensible à l'intérieur du film d'hydrogel réticulé passe de la phase gel à une phase liquide ; et à permettre aux cellules