RAPID SINGLE-STEP GRADIENT METHOD FOR THE GENERATION OF NANOANTIBODIES

Disclosed is a rapid single-step gradient method for the rapid generation of nanoantibodies (VHH) against any antigen, wherein the method comprises separating nanoantibodies against a specific antigen from a nanoantibody expression library by means of the following steps: (a) binding an antigen of interest to beads made of polymers that allow protein binding; (b) incubating microorganisms of the expression library with the beads from step (a); (c) putting the beads from step (b) on a tube with an inert medium with a density greater than or equal to 1 g/mL and centrifuging for 45 seconds to 2 minutes at a speed of 150-250 g; and (d) discarding the upper supernatant fraction with the free microorganisms, and obtaining the beads with the bound microorganisms, which correspond to those that express VHH that recognises the antigen. Método de gradiente rápido de un solo paso para la generación rápida de nanoanticuerpos (VHH) contra cualquier antígeno. Donde el método comprende la separación de nanoanticuerpos contra un antígeno específico desde una librería de expresión de nanoanticuerpos a través de las siguientes etapas: (a) unir el antígeno de interés a perlas hechas de polímeros que permitan unión de proteínas (b) incubar los microrganismos de la librería de expresión con las perlas de la etapa (a), (c) poner las perlas de la etapa (b) sobre un tubo con un medio inerte con una densidad mayor o igual a 1 g/mL y centrifugar por 45 s a 2 minutos a una velocidad entre 150 a 250 g; d) descartar la fracción superior y sobrenadante con los microorganismos libres, y obtener las perlas con los microorganismos ligados, que corresponden a aquellos que expresan VHH que reconoce al antígeno. L'invention concerne une méthode de gradient rapide à un seul passage pour la production rapide de nano-anticorps (VHH) contre n'importe quel anticorps. La méthode comprend la séparation de nano-anticorps contre un antigène spécifique depuis une banque d'expression de nano-anticorps par l'intermédiaire des étapes suivantes : (a) la liaison de l'antigène d'intérêt à des perles constituées de polymères qui permettent la liaison de protéines, (b) l'incubation des micro-organismes de la banque d'expression avec les perles de l'étape (a), (c) la disposition des perles de l'étape (b) sur un tube avec un milieu inerte présentant une densité supérieure ou égale à 1 g/mL et la centrifugation pendant 42 s à 2 minutes à une vitesse comprise entre 150 et 250 g, (d) le rejet de la fraction supéri