METHOD FOR PREPARING DNA LIBRARY

Provided are: a method for preparing a DNA library for identifying a microbial species using a nanopore sequencer within a shorter period of time than before; and a method for identifying a microorganism contained in a test sample using the aforesaid method. The present invention provides a method for preparing a DNA library for identifying a microbial species using a nanopore sequencer, said method comprising: a DNA extraction step for suspending microbial cells, which have been isolated and cultured, in an alkali solution at pH 8.0-8.6, heating the thus obtained suspension at 90-100°C for 1-15 minutes, centrifuging the same and then collecting the supernatant; a PCR step for, using DNA contained in the supernatant as a template, performing hot start PCR with the use of a polymerase which requires 10 seconds or less for a 1 kb extension; and an adaptor addition step for adding an adaptor, which carries a motor protein bonded thereto, to a terminus of the PCR product obtained in the PCR step. L'invention fournit un procédé selon lequel une banque d'ADN destinée à identifier des variétés de bactéries à l'aide d'un séquenceur de nanopore, est préparée en un temps plus court que dans l'art antérieur, et un procédé selon lequel des microorganismes contenus dans un échantillon sont identifiés en mettant en œuvre ce procédé. Plus précisément, l'invention fournit un procédé de préparation de banque d'ADN selon lequel est préparée une banque d'ADN destinée à identifier des variétés de bactéries à l'aide d'un séquenceur de nanopore, et qui présente : une étape d'extraction d'ADN au cours de laquelle une cellule bactérienne isolée et cultivée, est mise en suspension dans une solution alcaline de pH compris entre 8,0 et 8,6, la suspension ainsi obtenue est soumise à un traitement par chauffage entre 90 et 100°C pendant 1 à 15 minutes, puis un surnageant est recueilli par traitement de séparation centrifuge; une étape de réaction en chaîne de polymérase (PCR) au cours de laquelle une réaction en chaîne de polymérase à chaud est effectuée à l'aide d'une polymérase présentant un temps nécessaire à une élongation de 1kb inférieur ou égal à 10 secondes, avec un ADN contenu dans ledit surnageant pour matrice; et une étape d'ajout d'adaptateur au cours de laquelle un adaptateur auquel est liée une protéine motrice est ajouté à une terminaison du produit de la réaction en chaîne de polymérase obtenu lors de ladite étape de réaction en chaîne de polymérase. ナノポアシークエンサーを用いて菌種を