SPECTRAL UNMIXING

Systems and methods are provided for microscopically and fluorescently imaging cell -hearing biological samples or other samples of interest. A microscope objective or other optical elements that exhibits chromatic aberration can be used to obtain images of fluorophores or other contrast agents at different wavelengths. The obtained images are then used to correct each other, e.g., to remove artifacts in an image of a shorter-wavelength fluorophore that are caused by cross-talk from a longer-wavelength fluorophore. A longer-wavelength image, taken at a focal distance corresponding to the shorter-wavelength fluorophore, is taken and used to subtract the acti v ity of the 1 on ger- wavelength fluorophore in the shorter- wav el ength image. The longer-wavelength image may be taken using a microscope set to the shorter-wavelength focal distance. Alternatively, the longer-wavelength image may be simulated by applying a blurring filter or other methods to a longer-wavelength image taken when the microscope is set to the longer-wavelength focal distance. L'invention concerne des systèmes et des procédés pour l'imagerie microscopique et par fluorescence d'échantillons biologiques cellulaires ou d'autres échantillons d'intérêt. L'objectif d'un microscope ou d'autres éléments optiques qui présentent une aberration chromatique peuvent être utilisés pour obtenir des images de fluorophores ou d'autres agents de contraste à différentes longueurs d'onde. Les images obtenues sont ensuite utilisées pour se corriger mutuellement, par exemple, pour éliminer, dans une image d'un fluorophore de longueur d'onde inférieure, des artefacts qui sont provoqués par une interférence associée à un fluorophore de longueur d'onde supérieure. Une image de longueur d'onde supérieure, prise à une distance focale correspondant au fluorophore de longueur d'onde inférieure, est prise et utilisée pour soustraire l'activité du fluorophore de longueur d'onde supérieure dans l'image de longueur d'onde inférieure. L'image de longueur d'onde supérieure peut être prise à l'aide d'un microscope réglé sur la distance focale de longueur d'onde inférieure. En variante, l'image de longueur d'onde supérieure peut être simulée par application d'un filtre de flou ou d'autres procédés à une image de longueur d'onde supérieure prise lorsque le microscope est réglé sur la distance focale de longueur d'onde supérieure.