SPECIFIC DETECTION OF DEOXYRIBONUCLEIC ACID SEQUENCES USING NOVEL CRISPR ENZYME-MEDIATED DETECTION STRATEGIES

Embodiments disclosed herein include devices, methods, and systems for direct, selective, and sensitive detection of single-stranded and double-stranded target DNA sequences from various sources using a programed Cast 2a protein. When activated by binding a target DNA sequence, the Cas12a cleaves a tether releasing a reporter molecule that may then be detected. In some embodiments, the systems, methods, and devices may include a filter or membrane that may help to separate the tethered and untethered reporter molecules. These devices, systems, and techniques allow a user to rapidly process samples that may contain the target DNA, without needing to amplify the target sequences. These devices and methods may be used to assay a wide variety of samples and target DNA sources, for the presence or absence of a specific target DNA sequences. Compositions and kits, useful in practicing these methods, for example detecting a target DNA in a biological sample, are also described. Des modes de réalisation de la présente invention comprennent des dispositifs, des procédés et des systèmes pour la détection directe, sélective et sensible de séquences d'ADN cible simple brin et double-brin émanant de diverses sources faisant appel à une protéine Cas12a programmée. Lorsqu'elle est activée par liaison à une séquence d'ADN cible, la Cas12a clive une attache libérant une molécule rapporteur qui peut alors être détectée. Dans certains modes de réalisation, les systèmes, procédés et dispositifs peuvent comprendre un filtre ou une membrane qui peut aider à séparer les molécules rapporteurs attachées et non attachées. Ces dispositifs, systèmes et techniques permettent à un utilisateur de traiter rapidement des échantillons qui peuvent contenir l'ADN cible, sans avoir besoin d'amplifier les séquences cibles. Ces dispositifs et procédés peuvent être utilisés pour doser une large gamme d'échantillons et de sources d'ADN cibles, pour la présence ou l'absence de séquences d'ADN cible spécifique. L'invention concerne également des compositions et des kits, utiles dans la mise en œuvre de ces procédés, par exemple pour la détection d'un ADN cible dans un échantillon biologique.