PREPARATION METHOD AND APPLICATION OF RECOMBINANT MUTANT COLLAGENASE

Provided are purification methods and uses of a recombinant mutant collagenase, and methods for preparing high-purity mutant ColH and the purified enzyme product. The method for preparing high-purity mutant ColH includes expressing recombinant mutant collagenase protein with single mutation of E451D in ColH by using specific host strain E. coli BL21 (DE3), and improving yield of the target protein after induction by low-temperature fermentation. The purification includes five steps: Capto Phenyl HS hydrophobic interaction chromatography; Capto Q anion exchange chromatography; Capto Octyl hydrophobic interaction chromatography; Phenyl HP hydrophobic interaction chromatography and Source 15Q anion exchange chromatography. The target protein obtained has purity of over 98%. La présente invention concerne des procédés de purification et des utilisations d'une collagénase mutante recombinante, et des procédés de préparation de ColH mutante de haute pureté et le produit d'enzyme purifié. Le procédé de préparation de ColH mutante de haute pureté comprend l'expression de protéine collagénase mutante recombinante avec la mutation unique de E451D dans ColH en utilisant la souche hôte spécifique E. coli BL21 (DE3), et l'amélioration du rendement de la protéine cible après induction par fermentation à basse température. La purification comprend cinq étapes : la chromatographie d'interaction hydrophobe Capto Phényle HS ; la chromatographie à échange d'anions Capto Q ; la chromatographie d'interaction hydrophobe Capto Octyle ; la chromatographie d'interaction hydrophobe Phényle HP et la chromatographie à échange d'anions Source 15Q. La protéine cible obtenue présente une pureté supérieure à 98 %.