RNA SILENCING NANOZYMES

Disclosed herein are improved nanozymes for targeting RNA. The disclosed nanozymes are synthesized using recombinant RNase A with site-specific cysteine- substituted mutations that can be covalently functionalized with a length-tunable multi-thiol tether and then loaded onto gold particles through multiple gold-sulfur bonds. This new RNase A loading mechanism is site specific, and it allows high- density loading of alkylthiol modified DNA oligonucleotides. The disclosed nanozymes can also include additional capturer strands and/or involve DNA- recombinant-RNase-A unibodies to further increase the nanozyme's enzymatic activity and target selectivity. Also disclosed are functional on-off switchable nanozymes to control nanozyme activity. In some embodiments, the disclosed nanozyme are core-free hollow forms. The removal of the inorganic nanoparticle cores from nanozymes can effectively eliminate the potential long-term toxicity induced by the core, and also creates a cavity for loading and delivery of small molecule drugs. L'invention concerne des nanozymes améliorées permettant de cibler l'ARN. Les nanozymes de l'invention sont synthétisées à l'aide de RNase A recombinante pourvue de mutations à substitution cystéine spécifiques de site, qui peuvent être fonctionnalisées de manière covalente avec une attache multi-thiol à longueur réglable puis chargées sur des particules d'or par l'intermédiaire de multiples liaisons or-soufre. Ce nouveau mécanisme de chargement à RNase A est spécifique de site et il permet un chargement à haute densité d'oligonucléotides d'ADN modifiés par un alkylthiol. Les nanozymes de l'invention peuvent également comprendre des brins de capture supplémentaires et/ou impliquer des monocorps de RNase-A de recombinaison d'ADN pour augmenter encore l'activité enzymatique de la nanozyme et la sélectivité cible. L'invention concerne également des nanozymes fonctionnelles commutables en marche-arrêt, permettant de réguler l'activité nanozymatique. Dans certains modes de réalisation, les nanozymes décrites sont des formes creuses sans noyau. L'élimination des noyaux de nanoparticules inorganiques des nanozymes peut éliminer efficacement la toxicité potentielle à long terme induite par le noyau et crée également une cavité permettant le chargement et l'administration de médicaments à petites molécules.