METHOD FOR DIFFERENTIATION OF HUMAN PLURIPOTENT STEM CELL LINES IN SUSPENSION CULTURE

Described herein are methods of differentiation of pluripotent stem cells into hematopoietic precursor cells, hematopoietic progenitor cells, erythroblast cells, and enucleated erythroblast cells, wherein the method is carried out under suspension agitation, and a GSK-3-inhibitor or a Wnt pathway activator is added during a stage of mesoderm induction. In the preferred embodiment, the pluripotent stem cells are expanded in agitated microcarrier culture and the GSK-3-inhibitior is CHIR99021. Also disclosed herein are cell culture media for use in the methods disclosed herein, as well as kits for performing the same. L'invention concerne des procédés de différenciation de cellules souches pluripotentes en cellules précurseurs hématopoïétiques, cellules progénitrices hématopoïétiques, cellules érythroblastiques et cellules érythroblastiques énucléées, le procédé étant mis en oeuvre sous agitation de suspension, et un inhibiteur de GSK-3 ou un activateur de la voie Wnt étant ajouté pendant une étape d'induction du mésoderme. Dans le mode de réalisation préféré, les cellules souches pluripotentes sont développées dans une culture sur microporteurs en mode agité et l'inhibiteur de GSK-3 est CHIR99021. L'invention concerne également des milieux de culture cellulaire destinés à être utilisés dans les procédés de l'invention, ainsi que des kits permettant de les mettre en oeuvre.