MEANS AND METHODS FOR PRODUCTION OF SERINE ADP-RIBOSYLATED FORMS OF PROTEINS AND PEPTIDES

The present invention relates to a method for the production of a serine ADP-ribosylated protein or peptide comprising preparing an aqueous buffered solution comprising 5 to 60 mM, preferably 10 to 60 mM of a buffer and having a pH between 5.0 and 9.0, preferably between 5.5 to 8.5, and most preferably between 6.1 to 8.3, said solution further comprising (a) 0.2 to 2.5 mM NAD+, (b) at least 50 nM, preferably 50 to 3000 nM PARP-1, PARP-2 or the PARP-1 variant E988Q, (c) at least 100 nM, preferably 100 to 5000 nM HPF1, (d) at least 10 μg/mL, preferably 10 μg/mL to 200 μg/rnL sonicated DNA, said sonicated DNA preferably comprising DNA fragments of 10 to 330 bp, and (e) up to 600 μΜ protein or peptide, said protein or peptide comprising at least one serine, thereby generating a reaction mix, in which the protein or peptide becomes serine ADP-ribosylated. La présente invention concerne une méthode de production d'une protéine ou d'un peptide sérine ADP-ribosylée comprenant la préparation d'une solution aqueuse tamponnée comprenant de 5 à 60 mM, de préférence de 10 à 60 mM d'un tampon et ayant un pH compris entre 5,0 et 9,0, de préférence entre 5,5 et 8,5, et idéalement entre 6,1 et 8,3, ladite solution comprenant en outre (a) 0,2 à 2,5 mM de NAD+, (b) au moins 50 nM, de préférence 50 à 3 000 nM de PARP-1, PARP-2 ou la variante de PARP-1 E988Q, (c) au moins 100 nM, de préférence 100 à 5000 nM de HPF1, (d) au moins 10 µg/mL, de préférence 10 µg/mL à 200 μg/mL d'ADN soniqué, ledit ADN soniqué comprenant de préférence des fragments d'ADN de 10 à 330 pb, et (e) jusqu'à 600 μΜ de protéine ou de peptide, ladite protéine ou ledit peptide comprenant au moins une sérine, générant ainsi un mélange réactionnel, dans lequel la protéine ou le peptide devient une sérine ADP-ribosylée.