METHODS FOR IMPROVED HOMOLOGOUS RECOMBINATION AND COMPOSITIONS THEREOF

The present disclosure relates to methods, kits, and compositions for improving the efficiency of homologous recombination. In particular, the disclosure relates to methods for introducing a nucleic acid cutting entity for DNA editing into cells that are difficult to transfect. Generally, the nucleic acid cutting entity is introduced into the cell without the use of viral vectors. The disclosure also relates to cloning DNA molecules directly into a genome with the combined use of promoter trapping and short homology arms, nuclear localization signal, and/or binding one or more DNA binding agents (TAL effector domain or truncated guide RNA bound by Cas9) to specific sites thereby displacing or restructuring chromatin at the target locus, and/or it increasing the accessibility of the target locus to further enzymatic modifications. The methods and compositions provided herein are, inter alia, useful for genome editing and enhancing enzymatic processes involved therein. La présente invention concerne des méthodes, des kits et des compositions pour améliorer l'efficacité de la recombinaison homologue. En particulier, l'invention concerne des méthodes d'introduction d'une entité de coupe d'acide nucléique pour l'édition d'ADN dans des cellules qui sont difficiles à transfecter. De manière générale, l'entité de coupe d'acide nucléique est introduite dans la cellule sans l'utilisation de vecteurs viraux. L'invention concerne également le clonage de molécules d'ADN directement dans un génome à l'aide de l'utilisation combinée de promoteur de piégeage et de bras d'homologie courts, de signal de localisation nucléaire et/ou de liaison d'un ou plusieurs agents de liaison à l'ADN (domaine effecteur TAL ou ARN guide tronqué lié par Cas9) à des sites spécifiques, ce qui permet de déplacer ou de restructurer la chromatine au niveau du locus cible, et/ou d'augmenter l'accessibilité du locus cible à d'autres modifications enzymatiques. Les méthodes et les compositions de l'invention sont, entre autres, utiles pour l'édition de génome et l'amélioration de processus enzymatiques impliqués dans celle-ci.