METHOD FOR ASSEMBLY OF POLYNUCLEIC ACID SEQUENCES USING PHOSPHOROTHIOATE BONDS WITHIN LINKER OLIGOS

A method for assembling polynucleic acids that introduces phosphorothioate bonds into the linker oligos during the assembly procedure in order to use exonucleases to isolate the DNA of interest, thereby eliminating any cumbersome purification steps, such as gel electrophoresis and significantly increasing the overall selectivity and efficiency of the method. The present invention introduces a phosphorothioate bond by replacing a non-bridging oxygen within the phosphate backbone of the nucleic acid sequence with a sulfur (S) atom. Introduction of this sulfur atom results in an internucleotide linkage that is resistant to nuclease cleavage. Consequently, by adding such modified S linkers to form nuclease resistant ends of part-linker DNA, the present invention allows the use of exonucleases to degrade parts that do not have linkers ligated to their ends to isolate only the part-linker DNA of interest to increase assembly efficiency and selectivity and avoiding the need for purification by gel electrophoresis. La présente invention concerne un procédé d'assemblage de poly(acides nucléiques) qui introduit des liaisons phosphorothioates dans des oligomères lieurs durant la procédure d'assemblage afin d'utiliser des exonucléases pour isoler l'ADN d'intérêt, éliminant ainsi toutes les étapes de purification fastidieuses, telles que l'électrophorèse sur gel et qui accroît de manière considérable la sélectivité et l'efficacité globales du procédé. La présente invention introduit une liaison phosphorothioate en remplaçant un oxygène non pontant à l'intérieur du squelette phosphate de la séquence d'acides nucléiques par un atome de soufre (S). L'introduction de cet atome de soufre résulte en une liaison internucléotidique qui est résistante au clivage par nucléase. En conséquence, en ajoutant de tels lieurs (S) modifiés pour former des extrémités résistantes à la nucléase de l'ADN partie-lieur, la présente invention permet l'utilisation des exonucléases pour dégrader des parties qui ne présentent pas de lieurs ligaturés à leurs extrémités pour isoler uniquement l'ADN partie-lieur d'intérêt pour accroître l'efficacité et la sélectivité de l'assemblage et éviter le besoin de purification par électrophorèse sur gel.