PROCESSIVE TEMPLATE INDEPENDENT DNA POLYMERASE VARIANTS

An enzymatic method of making a polynucleotide is provided. The method includes combining a selected nucleotide triphosphate, one or more cations, a template-independent polymerase, and an associated processivity factor in an aqueous reaction medium including a target substrate comprising an initiat...

Ausführliche Beschreibung

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Bibliographische Detailangaben
Hauptverfasser:	GRISWOLD, Kettner John Frederick, CHURCH, George M, TURCZYK, Brian M, GARRUSS, Alexander, WIEGAND, Daniel Jordan
Format:	Patent
Sprache:	eng ; fre
Schlagworte:	BEER BIOCHEMISTRY CHEMISTRY COMPOSITIONS THEREOF CULTURE MEDIA DERIVATIVES THEREOF ENZYMES ENZYMOLOGY FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE METALLURGY MICROBIOLOGY MICROORGANISMS OR ENZYMES MUTATION OR GENETIC ENGINEERING NUCLEIC ACIDS NUCLEOSIDES NUCLEOTIDES ORGANIC CHEMISTRY PEPTIDES PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS SPIRITS SUGARS VINEGAR WINE
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Beschreibung
Zusammenfassung:	An enzymatic method of making a polynucleotide is provided. The method includes combining a selected nucleotide triphosphate, one or more cations, a template-independent polymerase, and an associated processivity factor in an aqueous reaction medium including a target substrate comprising an initiator sequence and having a 3' terminal nucleotide attached to a single stranded portion, such that the template-independent polymerase and the associated processivity factor interact with the target substrate under conditions which covalently add one or more of the selected nucleotide triphosphate to the 3' terminal nucleotide. Also provided are mutant template-independent polymerases having a processivity factor attached thereto. L'invention concerne un procédé enzymatique de production d'un polynucléotide. Le procédé comprend la combinaison d'un nucléotide triphosphate sélectionné, d'un ou de plusieurs cations, d'une polymérase indépendante de la matrice, et d'un facteur de processivité associé dans un milieu réactionnel aqueux comprenant un substrat cible comprenant une séquence d'initiateur et ayant un nucléotide 3'-terminal attaché à une partie monocaténaire, de telle sorte que la polymérase indépendante de la matrice et le facteur de processivité associé interagissent avec le substrat cible dans des conditions qui ajoutent par liaison covalente un ou plusieurs nucléotides triphosphates sélectionnés au nucléotide 3'-terminal. L'invention concerne également des polymérases indépendantes de la matrice mutantes sur auxquelles est attaché un facteur de processivité.