METHODS FOR DETECTING OLIGONUCLEOTIDES IN A SAMPLE

Certain embodiments of the invention provide a method (i.e., Enzyme Linked Oligonucleotide Sorbent Assay (ELOSA)) for the detection and/or quantification of a test oligonucleotide (e.g., a small oligonucleotide) in a test sample, such as a biological fluid, comprising: a) contacting the test sample with i) a capture reagent bound to a solid support, wherein the capture reagent comprises an oligonucleotide comprising a nucleic acid sequence complementary to the test oligonucleotide; and ii) a competition oligonucleotide operably linked to an enzyme, wherein the competition oligonucleotide comprises a nucleic acid sequence complementary to the capture oligonucleotide; thereby creating a reaction mixture; b) contacting the reaction mixture with a substrate that specifically binds to the enzyme, thereby generating an enzyme-substrate reaction product; and c) measuring the concentration of the enzyme-substrate reaction product, so as to detect and/or quantify the test oligonucleotide. Certains modes de réalisation de l'invention concernent un procédé (c'est-à-dire dosage d'oligonucléotides liés à des enzymes (ELOSA)) pour la détection et/ou la détermination quantitative d'un oligonucléotide d'essai (par exemple, un petit oligonucléotide) dans un échantillon d'essai, tel qu'un fluide biologique, consistant à : a) mettre l'échantillon d'essai en contact avec i) un réactif de capture lié à un support solide, le réactif de capture comprenant un oligonucléotide comprenant une séquence d'acide nucléique complémentaire à l'oligonucléotide test ; et ii) un oligonucléotide de compétition lié de manière fonctionnelle à une enzyme, l'oligonucléotide de compétition comprenant une séquence d'acide nucléique complémentaire à l'oligonucléotide de capture ; créant ainsi un mélange réactionnel ; b) mettre le mélange réactionnel en contact avec un substrat qui se lie spécifiquement à l'enzyme, générant ainsi un produit réactionnel enzyme-substrat ; et c) mesurer la concentration du produit réactionnel enzymatique-substrat, de manière à détecter et/ou déterminer quantitativement l'oligonucléotide d'essai.