Bioaffinity assay method utilizing two-photon excitation of fluorescence

The invention relates to a separation free bioanalytical assay method for qualitatively and/or quantitatively determining an analyte (4) in a sample of a biological fluid or suspension. The invention resides in that the method comprises, apart from essential steps for a two-photon excitation based assay method well known in prior art, the further steps of: a) recording focus positions and corresponding two-photon excited fluorescence emission photon counts of a plurality of microparticles (1) of a device; b) calculating a correction matrix for the device employing the recorded focus positions and corresponding two-photon excited fluorescence emission photon counts, and c) correcting two-photon excited fluorescence emission photon counts from the microparticles (1) of said device employing the correction matrix obtained for the device employing the recorded focus positions and the corresponding two-photon excited fluorescence emission counts. L'invention concerne un procédé de test bioanalytique sans séparation servant à déterminer qualitativement et/ou quantitativement un analyte (4) dans un échantillon d'un fluide ou d'une suspension biologique. L'invention est caractérisée en ce que le procédé comprend, outre les étapes essentielles servant à un procédé de test à base d'excitation à deux photons bien connues dans l'état de la technique, les étapes supplémentaires consistant : a) à enregistrer les positions de focalisation et les comptages de photons d'émission de fluorescence excitée par deux photons d'une pluralité de microparticules (1) d'un dispositif ; b) à calculer une matrice de correction servant au dispositif utilisant les positions de focalisation enregistrées et les comptages de photons d'émission de fluorescence excitée par deux photons correspondants, et c) à corriger par les comptages de photons d'émission de fluorescence excitée par deux photons provenant des microparticules (1) dudit dispositif utilisant la matrice de correction obtenue pour le dispositif utilisant les positions de focalisation enregistrées et les comptages de photons d'émission de fluorescence excitée par deux photons correspondants.