ENZYME COMPOSITION FOR DNA END REPAIR, ADENYLATION, PHOSPHORYLATION

Enzyme compositions and their method of use that provide ready-to-use master mixtures. Thexcompositions comprise a modified thermophilic DNA polymerase lacking 5'-3' and 3'-5' exonucleasexactivity premixed with T4 DNA polymerase, Klenow fragment and T4 polynucleotide kinase and all otherxnecessary components, including reaction buffer and nucleoside triphosphates, required to perform DNAxblunting, phosphorylation, and single nucleotide extension reactions in one tube and in two steps. Among other benefits, the mixture of different enzymes, buffers and nucleoside triphosphates is stable during prolonged storage. La présente invention concerne des compositions enzymatiques et leur procédé d'utilisation pour obtenir des mélanges maîtres prêts à l'emploi. Les compositions comprennent une ADN polymérase thermophile modifiée dépourvue de l'activité 5'-3' et 3'-5' exonucléase préalablement mélangée avec l'ADN polymérase du T4, le fragment de Klenow et la polynucléotide kinase du T4 et tout autres constituants nécessaires, y compris un tampon de réaction et des nucléoside triphosphate, requis pour obtenir des extrémités franches d'ADN, des réactions de phosphorylation et d'extension mononucléotidique dans un tube unique et en deux étapes. Entre autres avantages, le mélange des différentes enzymes, tampons et nucléosides triphosphates est stable pendant un stockage prolongé.