PROCESS FOR RECOVERING AND PURIFYING CD133+ MONONUCLEAR CELLS USING AQUEOUS TWO-PHASE SYSTEMS

The invention relates to a process for the fractionation, recovery and purification of CD133+ mononucleated cells from a biological matrix rich in stem cells (umbilical cord, mobilized peripheral blood, bone marrow) using an aqueous two-phase system having at least one step. The invention is suitable for use in the medical field for the recovery of stem cells. The process consists of: construction of the polymer-polymer aqueous two-phase system (in its different modes), addition of the sample, agitation, centrifugation and separation of the phases for the subsequent recovery of same and quantification of CD133+ cells by means of flow cytometry. The phase rich in CD133+ is washed and resuspended in a medium suitable for its subsequent use. La presente invención trata de un proceso para el fraccionamiento, recuperación y purificación de células mononucleadas CD133+ a partir de una matriz biológica rica en células madre (cordón umbilical, sangre periférica movilizada, médula ósea) utilizando para ello un sistema de dos fases acuosas de al menos una etapa. La invención será empleada en el sector médico para la recuperación de células madre. El proceso consiste en la construcción del sistema de dos fases acuosas polímero-polímero (en sus diferentes modalidades), la adición de la muestra, agitación, centrifugación y separación de las fases para su posterior recuperación y cuantificación de células CD133+ mediante citometría de flujo. La fase rica en CD133+ es lavada y resuspendida en el medio adecuado para su posterior uso. La présente invention concerne un procédé de fractionnement, de récupération et de purification de cellules mononucléaires CD133+ à partir d'une matrice biologique riche en cellules mères (cordon ombilical, sang périphérique mobilisé, moelle osseuse) au moyen d'un système à deux phases aqueuses et au moins une étape. L'invention est destinée à être utilisée dans le secteur médical pour la récupération de cellules mères. Le procédé consiste à construire le système à deux phases aqueuses polymère-polymère (suivant leurs différentes modalités), à ajouter l'échantillon, à agiter, centrifuger et séparer les phases en vue de leur récupération ultérieure et la quantification des cellules CD133+ par cytométrie de flux. La phase riche en CD133+ est lavée et remise en suspension dans le milieu approprié en vue de son utilisation ultérieure.