MONOLITH-BASED PSEUDO-BIOAFFINITY PURIFICATION METHODS FOR FACTOR VIII AND APPLICATIONS THEREOF

The present disclosure relates to purification of Factor VIII protein and/or its fragments from various sources by employing monolith based pseudobioaffinity purification methods. In particular, L-histidine over CIM monolith [Histidine Ligand Affinity Chromatography (HLAC)] is used for the purification of wild-type factor VIII from plasma cryoprecipitate, recombinant B-domain deleted factor VIII (rBDD-FVIII) expressed in various host systems and recombinant factor VIII light chain expressed in Pichia pastoris. Further, immobilized metal over CIM monolith [Immobilized metal-ion affinity chromatography (IMAC)] is employed for the purification of wild-type factor VIII, rBDD-FVIII expressed in various host systems and recombinant factor VIII heavy chain expressed in Pichia pastoris. The purification efficiency showcased by the purification methods of the present disclosure is far superior when compared to the presently available methods for the purification of factor VIII which lead to significantly improved results in therapeutic applications involving factor VIII. La présente invention concerne la purification de la protéine de Facteur VIII et/ou de ses fragments à partir de diverses sources par l'utilisation de procédés de purification par pseudo-bioaffinité à base de monolithe. En particulier, la L-histidine sur monolithe CIM [chromatographie d'affinité sur ligand Histidine (HLAC)] est utilisée pour la purification du facteur VIII de type sauvage à partir d'un cryoprécipité de plasma, du facteur VIII à domaine B délété recombinant (rBDD-FVIII) exprimé dans divers systèmes hôtes et de la chaîne légère du facteur VIII recombinant exprimée dans Pichia pastoris. En outre, un métal immobilisé sur monolithe CIM [chromatographie d'affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC)] est utilisé pour la purification du facteur VIII de type sauvage, de rBDD-FVIII exprimé dans divers systèmes hôtes et de la chaîne lourde du facteur VIII recombinant exprimée dans Pichia pastoris. Le rendement de purification présenté par les procédés de purification de la présente invention est de loin supérieur lorsqu'il est comparé aux procédés actuellement disponibles pour la purification du facteur VIII qui conduisent à des résultats significativement améliorés dans des applications thérapeutiques mettant en jeu le facteur VIII.