HIGH THROUGHPUT SCREENING OF GLYCOSYL HYDROLASE ENZYMES

The present invention relates to a method of identifying a glycosyl hydrolase (GH) enzyme and a method for high throughput screening (HTS) of a GH activity. The methods comprise the steps of: - providing a plurality of samples each comprising an enzyme candidate; - providing a complex substrate of a...

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Hauptverfasser: WILLATS, WILLIAM GEORGE TYCHO, MELGOSA, SILVIA VIDAL
Format: Patent
Sprache:eng ; fre
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Beschreibung
Zusammenfassung:The present invention relates to a method of identifying a glycosyl hydrolase (GH) enzyme and a method for high throughput screening (HTS) of a GH activity. The methods comprise the steps of: - providing a plurality of samples each comprising an enzyme candidate; - providing a complex substrate of a plant material; - mixing the plurality of samples with the complex substrate to provide a plurality of mixtures; - incubating the plurality of mixtures to allow the enzyme candidates to interact with a carbohydrate in the complex substrate; - optionally inactivating the enzyme candidates; - comparing the carbohydrate compositions of the plurality of incubated mixtures with the carbohydrate composition of the complex substrate; - defining GH activities for the plurality of samples based on the comparisons of carbohydrate compositions. The invention may be used to identify GHs for use in the production of second generation biofuels. La présente invention concerne un procédé d'identification d'une enzyme glycosyle hydrolase (GH) et un procédé pour le criblage haut rendement (HTS) d'une activité glycosyle hydrolase (GH). Les procédés comprennent les étapes consistant à : fournir une pluralité d'échantillons comprenant chacun une enzyme candidate; fournir un substrat complexe d'un tissu végétal; mélanger la pluralité d'échantillons avec le substrat complexe pour donner une pluralité de mélanges; incuber la pluralité de mélanges pour permettre aux enzymes candidates d'interagir avec un glucide dans le substrat complexe; éventuellement désactiver les enzymes candidates; comparer les compositions glucidiques de la pluralité de mélanges incubés avec la composition glucidique du substrat complexe; définir les activités glycosyleS hydrolaseS (GH) pour la pluralité d'échantillons sur la base des comparaisons des compositions glucidiques. L'invention peut être utilisée pour identifier des glycosyleS hydrolaseS (GH) destinées à être utilisées dans la production de biocarburants de deuxième génération.