RECOMBINANT APOA-1M FROM ENGINEERED BACTERIA

Apolipoprotein A-1 Milano (ApoA-1M), the protein component of a high-density lipoprotein (HDL) mimic with promising potential for reduction of atherosclerotic plaque, is produced on a large scale by expression in E. coli. Significant difficulty with clearance of host cell proteins (HCPs) was experienced in the original manufacturing process, despite lengthy purification. Analysis of purified protein solutions and intermediate process samples led to the identification of several major HCPs, and a bacterial protease causing the production of a truncated species of ApoA-1M co-purifying with the product. Deletions in these genes from the original host strain succeeded in substantially reducing the levels of HCPs without adversely affecting overall fermentation productivity, contributing to a much more efficient and robust new manufacturing process. L'apolipoprotéine A-1 Milano (ApoA-1M), le composant protéique d'un mimétique de lipoprotéine de haute densité (HDL) présentant un potentiel prometteur de réduction de plaques d'athérosclérose est produite à grande échelle au moyen d'une expression chez E. coli. La clairance des protéines de cellule hôte (HCP) s'est avérée significativement difficile lors du processus de production initial, malgré une étape de purification longue. L'analyse de solutions de protéines purifiées et d'échantillons de procédé intermédiaire a permis d'identifier plusieurs HCP majeures, et une protéase bactérienne induisant la production d'une espèce tronquée de ApoA-1M est purifiée avec le produit. Des délétions dans les gènes à partir de la souche hôte d'origine ont permis de réduire sensiblement, avec succès, les niveaux de HCP sans affecter défavorablement la productivité générale du processus de fermentation, contribuant ainsi de manière plus efficace et solide au nouveau procédé de production.