SMOOTH MUSCLE-LIKE CELLS (SMLCs) DERIVED FROM HUMAN PLURIPOTENT STEM CELLS

This invention relates, e.g., to a method for differentiating mammalian (e.g., human) pluripotent stem cells (PSCs) into smooth muscle-like cells (SMLCs) in vitro, comprising a) plating a single-cell suspension of PSCs that are smaller than 50 µm at a seeding concentration of about 5x104 cells/cm2 - about 1x105 cells/cm2 onto a suitable surface, and culturing the cells under conditions which prevent the PSCs from aggregating and induce differentiation of the PSCs into vasculogenic progenitor cells; b) harvesting the cultured cells of step a) and separating them into a single cell suspension of cells that are smaller than 50 µm; and c) plating the single cell suspension of step b) at a seeding concentration of about 1 x 104 cells/ cm2 - about 5 x 104 cells/ cm2 on a suitable surface, and culturing the cells in a differentiation medium that is supplemented with platelet-derived growth factor BB (PDGF-BB) and transforming growth factor-beta 1 (TGF ß1), for a sufficient period of time to allow the vasculogenic progenitor cells to mature into SMLCs. In one embodiment of the invention, the cells from step c) are further subjected to a shear force of at least 1 dyne/cm2 for a time period sufficient to enhance differentiation, maturation and/or functionality of the cells. L'invention concerne, par exemple, un procédé pour la différenciation de cellules souches pluripotentes (PSC) mammifères (par exemple humaines) en cellules de type muscle lisse (SMLC) in vitro, comprenant a) l'étalement d'une suspension de cellules uniques de PSC qui sont inférieures à 50 µm à une concentration d'ensemencement d'environ 5x104 cellules/cm2 - environ 1x105 cellules/cm2 sur une surface appropriée et la culture des cellules dans des conditions qui empêchent l'agrégation des PSC et induisent une différenciation des PSC en cellules vasculogènes progénitrices; b) la récolte des cellules cultivées de l'étape a) et leur séparation en une suspension de cellules uniques qui sont inférieures à 50 µm; et c) l'étalement de la suspension de cellules uniques de l'étape b) à une concentration d'ensemencement d'environ 1 x 104 cellules/cm2 - environ 5 x 104 cellules/cm2 sur une surface appropriée et la culture des cellules dans un milieu de différenciation qui est additionné du facteur de croissance dérivé des plaquettes BB (PDGF-BB) et du facteur de croissance transformant beta 1 (TGF ß1), pendant un laps de temps suffisant pour permettre aux cellules progénitrices vasculogènes de mûrir en SMLC.