A CELL BASED SYSTEM FOR RAPID DETECTION AND QUANTIFICATION OF GENOTOXICITY

The cell system for rapid detection and determination of genotoxicity is a biosensor cell system with metabolicaly competent human cells, stable transfected with reporter gene, which is operationally linked to the promoter of gene, which responds to DNA damage, and solves the problem of rapid and accurate detection and quantification of genotoxic substances and other samples. In the preferred embodiment of this invention metabolicaly competent human cells HepG2 cells stable transfected with reporter gene, preferred the gene that encodes the fluorescent protein DsRed2, and a promoter that responds to DNA damage, preferred the p21 gene promoter are used. The vector construct by which the HepG2 cells are transfected is of composed of coding sequence of nucleotides that encode for DsRed protein that is operatively linked in cis configuration to promoter region of p21 gene. The method for genotoxicity determination consists of the following steps: contact HepG2-p21-DsRed cells with tested chemical or sample, incubation at 37oC/ 5% CO2, measurement of the fluorescence of the expressed protein DsRed with a microtiter plate reader at 24 and 48 hour of exposure, determination of cells density by MTT assay, and calculation of the normalized values of induced fluorescence, which are qualitative and quantitative indicator of genotoxic activity of the tested chemical or sample. La présente invention concerne un système cellulaire pour la détection et la détermination rapides de la génotoxicité. Ledit système est un système cellulaire à biocapteur qui utilise des cellules humaines métaboliquement compétentes, transfectées de façon stable en utilisant un gène rapporteur, qui est lié de façon fonctionnelle au promoteur de gène, qui répond à des avaries d'ADN, et qui résout le problème de la détection et de la quantification rapides et précises de substances génotoxiques et d'autres échantillons. Dans le mode de réalisation préféré de la présente invention, des cellules humaines métaboliquement compétentes HepG2, transfectées de façon stable en utilisant un gène rapporteur, le gène préféré étant le gène qui code la protéine fluorescente DsRed2, et un promoteur qui répond à des avaries d'ADN, le promoteur de gène préféré étant p21, sont utilisés. La construction de vecteur par laquelle les cellules HepG2 sont transfectées se compose de séquences de codage de nucléotides qui codent la protéine DsRed qui est liée de façon fonctionnelle, en position cis, à la région de promote