METHODS FOR PCR AND HLA TYPING USING RAW BLOOD

Provided are methods for amplifying a gene or RNA or sets thereof of interest using a tandem PCR process. The primers in the first PCR or set of PCR reactions are locus-specific. The primers in the second PCR or set of PCR reactions are specific for a sub-sequence of the locus-specific primers and completely consumed during the second PCR amplification. For RNA amplification, the first PCR is reverse transcription and the resulting cDNA(s) provide a template for cRNA synthesis, endpoint PCR or real time PCR. Also provided is a method of allelotyping a gene or set thereof by amplifying the gene(s) using tandem PCR on DNA or RNA comprising the sample, hybridizing the resulting amplicon or sets thereof to probes with sequences of gene-associated allele variations. A detectable signal indicating hybridization corresponds to an allelotype of the gene or a set of allelotypes for the set of genes. L'invention concerne des procédés d'amplification d'un gène ou d'un ARN ou d'ensembles d'intérêt de ceux-ci au moyen d'un processus PCR en tandem. Les amorces dans la première PCR ou l'ensemble de réactions PCR sont spécifiques d'un locus. Des amorces dans la deuxième PCR ou l'ensemble de réactions PCR sont spécifiques pour une sous-séquence des amorces spécifiques d'un locus et consumées totalement au cours de la deuxième amplification par PCR. Pour l'amplification de l'ARN, la première PCR est une transcription inverse et le ou les ADNc obtenus forment un gabarit pour la synthèse de l'ARNc, la PCR en point final ou la PCR en temps réel. L'invention concerne également une méthode d'allélotypage d'un gène ou d'un ensemble de gènes par amplification du ou des gènes par PCR en tandem sur l'ADN ou l'ARN comprenant l'échantillon, par hybridation de l'amplicon obtenu ou des ensembles d'amplicons sur des sondes ayant des séquences de variations des allèles associées à des gènes. Un signal détectable indiquant l'hybridation correspond à un allélotype du gène ou à un ensemble d'allélotypes pour l'ensemble de gènes.