MULTIPLEX DETECTION

The present invention relates to a method for designing polynucleotide primer/probes capable of specific and mismatch tolerant hybridization useful in multiplex detection and comprising capture and amplification steps. Said method comprises identifying a nucleation site of 6-9 nucleotides, and building a nucleotide sequence by positioning nucleotides substantially complementary to said nucleation site and positioning nucleotides outside said site and introducing either universal base analogues such as deoxyinosine at sites of variation and/or positioning degenerate nucleotide positions at sites of variation thereby obtaining a continous primer/probe. The present invention also relates multiplex detection of nucleic acids and primer/probes and kits for use in such a method, as well as a computer program for determining how the primer/probes should be constructed for an optimised result. L'invention concerne un procédé destiné à mettre au point une amorce / des sondes polynucléotidiques permettant une hybridation spécifique et tolérante au mésappariement utile dans la détection multiplex et comprenant des étapes d'amplification et de capture. Ce procédé consiste à identifier un site de nucléation de 6 à 9 nucléotides, et à construire une séquence nucléotidique par positionnement de nucléotides sensiblement complémentaires au site de nucléation et à positionner ces nucléotides hors du site et à introduire des analogues de bases universelles tels que de la désoxyinosine au niveau de sites de variation et/ou à positionner des positions de nucléotides dégénérés au niveau des sites de variation, obtenant ainsi une amorce / sonde continue. Cette invention concerne également une détection multiplex d'acides nucléiques et une amorce / des sondes et des nécessaires utilisés dans un tel procédé, ainsi qu'un programme d'ordinateur destiné à déterminer comment devrait être construites l'amorce / les sondes pour un résultat optimisé.