PURIFICATION OF NON-GLYCOSYLATED PROTEINS

The current invention reports a method for the purification of a not-glycosylated, heterologous polypeptide, which has been recombinantly produced in a prokaryotic cell, wherein the method comprises three chromatography steps of which the first chromatography step selected from i) hydrophobic charge induction chromatography, or ii) hydrophobic interaction chromatography, or iii) affinity chromatography, or iv) ion exchange chromatography, the second chromatography step is selected from i) anion exchange chromatography, or ii) cation exchange chromatography, or iii) hydroxylapatite chromatography, or iv) hydrophobic interaction chromatography, and the a third chromatography step is selected from i) hydrophobic charge induction chromatography, or ii) anion exchange chromatography, or iii) cation exchange chromatography, or iv) hydrophobic interaction chromatography, whereby the first chromatography step is an affinity chromatography in case of polypeptides capable of interacting with metal ligands, the second chromatography step is not a hydroxylapatite chromatography step in case of polypeptides with an isoelectric point below 6.0, and the third chromatography step can be performed in flow-through mode with polypeptides having a low or high isoelectric point. La présente invention porte sur un procédé pour la purification d'un polypeptide hétérologue non glycosylé, qui a été obtenu de façon recombinante dans une cellule procaryote. Le procédé comprend trois étapes de chromatographie dont la première est choisie parmi i) une chromatographie à induction de charge hydrophobe ou ii) une chromatographie à interaction hydrophobe ou iii) une chromatographie d'affinité ou iv) une chromatographie d'échange d'ions, la seconde est choisie parmi i) une chromatographie d'échange d'anions ou ii) une chromatographie d'échange de cations ou iii) une chromatographie sur hydroxylapatite ou iv) une chromatographie à interaction hydrophobe, et la troisième est choisie parmi i) une chromatographie à induction de charge hydrophobe ou ii) une chromatographie d'échange d'anions ou iii) une chromatographie d'échange de cations, ou iv) une chromatographie à interaction hydrophobe, ce par quoi la première étape de chromatographie est une chromatographie d'affinité dans le cas de polypeptides capables d'interagir avec des ligands métalliques, la seconde étape de chromatographie n'est pas une étape de chromatographie sur hydroxylapatite dans le cas de polypeptides avec un point isoélec