IONIZABLE ISOTOPIC LABELING REAGENTS FOR RELATIVE QUANTIFICATION BY MASS SPECTROMETRY

Relative quantification of metabolites by Electrospray Ionization Mass Spectrometry (ESI-MS) requiring a mechanism for simultaneous analysis of multiple analytes in two or more samples. Labeling reagents that are reactive to particular compound classes and differ only in their isotopic kit facilitating relative quantification and providing tangible evidence for the existence of specific functional groups. Heavy and light isotopic forms of methylacetimidate were synthesized and used as labeling reagents for quantification of amine-containing molecules, such as biological samples. Heavy and light isotopic forms of formaldehyde and cholamine were also synthesized and used independently as labeling reagents for quantification of amine-containing and carboxylic acid-containing molecules, such as found in biological samples. Advantageously, the labeled end-products are positively charged under normal acidic conditions involving conventional Liquid Chromatography Mass Spectrometry (LC/MS) applications. Labeled primary and secondary amine and carboxylic acid end-products also generated higher signals concerning mass-spectra than pre¬ cursor molecules and improved sensitivity. Improved accuracy concerning relative quantification was achieved by mixing heavy and light labeled Arabidopsis extracts in different ratios. Labeling strategy was further employed to ascertain differences in the amounts of amine-containing metabolites for two strains of Arabidopsis seeds. Selon la présente invention, la quantification relative de métabolites par spectrométrie de masse par électronébulisation (ESI-MS) requiert un mécanisme d'analyse simultanée de plusieurs analytes dans au moins deux échantillons. Des réactifs d'étiquetage réagissant à des classes de composés spécifiques et différant uniquement au niveau de leur kit isotopique facilitent la quantification relative et fournissent une évidence tangible de l'existence de groupes fonctionnels spécifiques. Des formes isotopiques lourdes et légères de méthylacétimidate ont été synthétisées et utilisées comme réactifs d'étiquetage pour quantifier des molécules contenant de l'amine, telles que celles se trouvant dans des échantillons biologiques. Des formes isotopiques lourdes et légères de formaldéhyde et de cholamine ont été synthétisées et utilisées indépendamment comme réactifs d'étiquetage pour quantifier des molécules contenant de l'amine et de l'acide carboxylique, telles que celles se trouvant dans des échantillons biologique