METHOD OF QUANTITATING NUCLEIC ACIDS BY FLOW CYTOMETRY MICROPARTICLE-BASED ARRAY

Disclosed is a method of measuring a target nucleic acid species in a sample (e.g., a biological sample) comprising amplifying multiple known concentrations of a standard nucleic acid, wherein the standard nucleic acid comprises the same sequence as the target nucleic acid or a fragment thereof; amplifying the target nucleic acid; hybridizing the amplified target nucleic acid with a population comprising a subset of microparticles to form a mixture, wherein each subset is distinguishable from other subsets based on a detectable parameter and wherein a subset of microparticles is coupled to an oligonucleotide that is complementary to a portion of the target and standard nucleic acids; hybridizing each of the amplified standard nucleic acid samples with a population comprising said subset of microparticles to form mixtures; analyzing the mixtures by flow cytometry, wherein the binding of a target nucleic acid and standard nucleic acid samples to a subset of microparticles is measured based on detection of a label; and determining the quantity of target nucleic acid in the biological sample. L'invention concerne une méthode destinée à mesurer une espèce d'acide nucléique cible dans un échantillon (par ex., un échantillon biologique), et consistant à amplifier de multiples concentrations connues d'un acide nucléique standard, cet acide nucléique standard comprenant la même séquence que l'acide nucléique cible ou un fragment correspondant, à amplifier l'acide nucléique cible, à hybrider l'acide nucléique cible amplifié avec une population comprenant un sous-ensemble de microparticules en vue de la formation d'un mélange, chaque sous-ensemble pouvant être distingué des autres sous-ensembles sur la base d'un paramètre détectable, un sous-ensemble de microparticules étant couplé à un oligonucléotide complémentaire d'une partie des acides nucléiques cible et standard, à hybrider chacun des échantillons d'acide nucléique standard amplifié avec une population comprenant ledit sous-ensemble de microparticules en vue de la formation de mélanges, à analyser les mélanges par cytométrie de flux, la liaison d'un acide nucléique cible et d'échantillons d'acide nucléique standard à un sous-ensemble de microparticules étant mesurée sur la base de la détection d'un marqueur, et à déterminer la quantité d'acide nucléique cible dans l'échantillon biologique.