N- TERMINAL PEG CONJUGATE OF ERYTHROPOIETIN

The present invention refers to conjugate of erythropoietin having higher bioactivity comprises an Erythropoietin glycoprotein having N-terminal a - amino group and aldehyde derivatives of polyethylene glycol, said erythropoietin glycoprotein being selected from the group consisting of human erythropoietin and analogs thereof, said aldehyde derivative of methoxy polyethylene glycol of the formula: PEG-R-CHO wherein R= alkyl group of formula -(CH2)n wherein n=2 to 4. The formula of the conjugate of the present invention is: PEG-R-CONH-EPO wherein R=alkyl group of formula -(CH2)n wherein n=2 to 4. Said erythropoietin according to the present invention is a recombinant erythropoietin (rhEPO) produced in animal cells; said erythropoietin conjugate is prepared by expressing, fermenting, and purifying rhEPO protein in recombinant animal cells and reacting EPO with PEG- Aldehyde to obtain N-terminally pegylated EPO by reductive amination reaction and then further purified to obtain pure N-terminally pegylated EPO. La présente invention concerne un conjugué d'érythropoïétine à bioactivité supérieure comprenant une glycoprotéine érythropoïétine avec un groupe a - amino et des dérivés aldéhyde de polyéthylène glycol N-terminal, ladite glycoprotéine érythropoïétine étant sélectionnée dans le groupe formé de l'érythropoïétine humaine et de ses analogues, ledit dérivé aldéhyde de méthoxy polyéthylène glycol étant représenté par la formule PEG-R-CHO, dans laquelle R = un groupe alkyle représenté par la formule -(CH2)n dans laquelle n = 2 à 4. La formule du conjugué de la présente invention est PEG-R-CONH-EPO, formule dans laquelle R = un groupe alkyle représenté par la formule -(CH2)n dans laquelle n = 2 à 4. L'érythropoïétine de la présente invention est une érythropoïétine de recombinaison (rhEPO) produite dans des cellules animales. Ledit conjugué d'érythropoïétine est préparé par expression, fermentation, et purification de la protéine rhEPO dans des cellules animales de recombinaison, et par mise en réaction de l'EPO avec PEG-aldéhyde pour obtenir une EPO à PEG N-terminal par une réaction d'amination réductrice, celle-ci étant ensuite purifiée pour obtenir une EPO à PEG N-terminal pure.