IMPROVED BIOSYNTETIC PRODUCTION OF 2, 3-TRANS-CHD

The invention relates to a process for the biosynthetic production of [5S,6S]-5,6-dihydroxy-cyclohexa-1,3-diene-1-carboxylic acid (2,3-trans-CHD) in an Escherichia microorganism having increased activity of isochorismate synthase and isochorismatase, and being deficient in activity of 2,3-dihydroxybenzoate synthase, wherein the process is carried out in a chorismate overproducing host microorganism also having decreased glucose dehydrogenase activity, or is carried out in a chorismate overproducing host microorganism naturally lacking glucose dehydrogenase activity. In this improved biosynthetic process, 2,3-trans-CHD is being produced in high yields and at concentrations in the biosynthetic reaction medium of at least 12 g/l. The invention further relates to the use of the supernatant of a process for the biosynthetic production of [5S,6S]-5,6-dihydroxy-cyclohexa-1,3-diene-1-carboxylic acid (2,3-trans-CHD) where the concentration of 2,3-trans-CHD in the process has arrived at a concentration of at least 12 g/l as a source for a co-factor for PQQ dependent enzymes. La présente invention concerne un procédé de production d'acide [5s,6s]-5,6-dihydroxycyclohexa-1,3-diène-1-carboxylique (2,3-trans-CHD) par biosynthèse dans un micro-organisme Escherichia présentant une activité accrue de l'isochorismate synthase et de l'isohorismatase, mais une activité déficiente de la 2,3-dihydroxybenzoate synthase. Ce procédé s'exécute dans un micro-organisme hôte surproducteur de chorismate et à activité déshydrogénase du glucose diminuée, ou dans un micro-organisme hôte surproducteur de chorismate naturellement privé d'activité déshydrogénase du glucose. Le procédé de l'invention permet de grands rendements de production de 2,3-trans-CHD à des concentrations d'au moins 12 g/l dans le milieu de réaction. L'invention propose également d'utiliser, comme source de co-facteur pour enzymes PQQ-dépendants (PyrroQuinoline-Quinone-dépendant), le surnageant d'un process de production d'acide [5s,6s]-5,6-dihydroxycyclohexa-1,3-diène-1-carboxylique (2,3-trans-CHD) par biosynthèse, la concentration de 2,3-trans-CHD dans le process atteignant au moins 12 g/l.