SCREENING USING POLARIZATION ANISOTROPY IN FRET EMISSIONS

Methods and apparatus are described for detecting specific binding between first and second chemical entities. The first chemical entity in association with a first fluorophore is immobilized. The second chemical entity is allowed to bind with the immobilized first chemical entity. The second chemical entity is or becomes coupled to a second fluorophore, which forms a FRET pair with the first fluorophore. The bound chemical entities are exposed to radiation at an excitation frequency for either the first or the second fluorophore, and polarization anisotropy of a FRET fluorescent signal from the bound chemical entities is measured to detect specific binding between the first and second chemical entities. Techniques are also disclosed for detecting whether a FRET interaction is occurring between a first chemical entity including a donor fluorophore and a second chemical entity including an acceptor fluorophore, using simultaneous anisotropy measurements at the wavelengths of the donor and acceptor fluorophores. L'invention concerne des procédés et des dispositifs servant à détecter une liaison spécifique entre une première et une deuxième entités chimiques. Ceci consiste à immobiliser cette première entité chimique en association avec un premier fluorophore; à laisser la deuxième entité chimique se lier à la première entité chimique immobilisée. La deuxième entité chimique est couplée, ou le devient, à un deuxième fluorophore, ce qui crée une paire de FRET avec le premier fluorophore. Ceci consiste également à exposer à un rayonnement les entités chimiques liées à une fréquence d'excitation pour soit le premier, soit le deuxième fluorophore, et à mesurer l'anisotropie de polarisation d'un signal fluorescent de FRET émanant des entités chimiques liées afin de détecter la liaison spécifique entre la première et la deuxième entités chimiques. Elle concerne également des techniques servant à détecter si une interaction de FRET apparaît entre une première entité chimique comprenant un fluorophore donneur et une deuxième entité chimique comprenant un fluorophore accepteur, au moyen de mesures d'anisotropie simultanées aux longueurs d'ondes des fluorophores donneur et accepteur.