NON-RANDOM METHOD OF GENE SHUFFLING

The present invention concerns the non-random assembling of DNA molecules in a DNA construct and methods of using such constructs, including the production of nucleic acid libraries. The non-random gene shuffling is preferably accomplished by the following steps. First, optionally, the amino acid sequences of proteins encoded by related gene families of interest are aligned and inspected for regions of conserved amino acid residues. These conserved regions, preferably of at least 4 (e.g. about 4 to 10) consecutive conserved amino acid residues are candidate regions for the subsequent design of PCR primers to amplify the variable or less conserved regions in between them, followed by non-random reassembly to create a recombinant nucleic acid genetic library of gene family variants. La présente invention concerne l'assemblage non aléatoire de molécules d'ADN dans une construction d'ADN, et des méthodes d'utilisation desdites constructions, y compris la génération de bibliothèques d'acides nucléiques. La modification génique non aléatoire s'effectue, de préférence, selon les étapes suivantes. Les séquences d'acides aminés de protéines codées par des familles de gènes d'intérêt associées sont d'abord, éventuellement, alignées puis examinées afin de détecter des zones contenant des restes d'acides aminés. Lesdites zones, de préférence formées d'au moins 4 (par exemple, d'environ 4 à 10) restes d'acides aminés consécutifs conservés, sont des zones candidates pour la mise au point ultérieure de sondes PCR afin d'amplifier les zones variables ou moins conservées, suivie d'un réassemblage non aléatoire afin de générer une bibliothèque génétique d'acides nucléiques de recombinaison des variants desdites familles de gènes.