ENZYME CONJUGATES WITH A PROGRAMMABLE SPECIFICITY, WHICH REACT IN A HIGHLY SPECIFIC MANNER WITH DNA

Die vorliegende Erfindung beschreibt das Prinzip, die Herstellung und die Ver­wendung von hochspezifisch mit DNA interagierenden Enzym-Konjugaten mit programmierbarer Spezifität. Diese erfindungsgemäßen Enzym-Konjugate beste­hen aus Enzymen, die über Linker kovalent mit Oligonukleotidderivaten verknüpft sind. Der Enzymanteil der erfindungsgemäßen Enzym-Konjugate bindet an seine Erkennungssequenz auf der Ziel-DNA, während der Oligonukleotidanteil über eine komplementäre Basenpaarung mit einer Triplex-Bildungsstelle (TFS) der Ziel-DNA eine Tripelhelix ausbildet. Die Enzym-Konjugate lassen sich durch geeignete Kombination von Enzym, Linker und Oligonukleotid maßschneidern und besitzen eine Erkennungsstelle auf der Ziel-DNA. Die erfindungsgemäßen Enzym-Konjugate eignen sich zur gezielten Manipulation großer DNA-Moleküle sowie zum Mapping genomischer DNA in vitro. In vitro und in vivo können sie zur Einführung eines gezielten Doppelstrangbruches verwendet werden, um die homologe Rekombination und / oder die DNA-Reparatur zu stimu­lieren und/oder zur Repression der Genexpression. The invention relates to the principle, the production and the use of enzyme conjugates with a programmable specificity, which interact in a highly specific manner with DNA. Said inventive enzyme conjugates consist of enzymes, which are covalently linked to oligonucleotide derivatives by means of linkers. The enzymatic portion of the inventive enzyme conjugates bonds to its identification sequence on the target DNA, whilst the oligonucleotide portion forms a triple helix by means of a complementary base pairing with a triplex forming sequence (TFS) of the target DNA. The enzyme conjugates can be tailored by a suitable combination of the enzymes, linkers and oligonucleotides and contain an identification site on the target DNA. The inventive enzyme conjugates are suitable for the targeted manipulation of large DNA molecules and for the mapping of genomic DNA in vitro. They can be used in vitro and in vivo for the introduction of a targeted double-strand break, to stimulate a homologous recombination and/or DNA repair and/or for the repression of gene expression. L'invention concerne le principe, la production et l'utilisation de conjugués enzymatiques à spécificité programmable qui interagissent de manière hautement spécifique avec l'ADN. Les conjugués enzymatiques selon l'invention sont constitués d'enzymes qui sont reliées de manière covalente à des dérivés d'oligonucléotides au moyen