INDUCIBLE FLUORESCENCE ASSAY

In one aspect, the invention provides fluorescent probes and assays. The probes include a fluorophore-quencher pair that undergoes a switch from dark to fluorescent in response to a reaction of the quencher. The switch of the probe from dark to fluorescent is typically mediated by an enzyme that acts directly or indirectly on the quencher, interfering with its ability to quench fluorescence emission from the fluorophore. In another aspect, the invention provides a reporter gene assay system and methods of using this system. The assay system includes a fluorophore-quencher probe and an enzyme that acts directly or indirectly on the quencher, increasing the fluorescent emission of the fluorophore. In still other aspects, the invention provides nucleic acid constructs and cells expressing the peptide products of these constructs. In assays of the invention, the presence of a target substance is detected by the switching of fluorescence mediated by the change in oxidation state of the quencher. The assay systems are of use in numerous assay formats, e.g., confirming the expression of the enzyme that acts on the quencher, and/or detecting a species conjugated to the enzyme. Selon un aspect, l'invention concerne des sondes fluorescentes et des essais de fluorescence. Les sondes comprennent une paire extincteur-fluorophore qui passe de l'état sombre à l'état fluorescent en réponse à une réaction de l'extincteur. La médiation du passage en question est généralement assurée par une enzyme qui agit directement ou indirectement sur l'extincteur, interférant avec son aptitude à éteindre l'émission de fluorescence du fluorophore. Selon un autre aspect, l'invention concerne un système d'essai de gène rapporteur et des procédés d'utilisation correspondants. Le système comprend une sonde fluorophore-extincteur et une enzyme qui agit directement ou indirectement sur l'extincteur, augmentant l'émission de fluorescence du fluorophore. Par ailleurs, l'invention concerne des constructions d'acides nucléiques et des cellules exprimant les produits peptidiques de ces constructions. Dans les essais décrits, la présence d'une substance cible est décelée par le passage en fluorescence considéré, dont la médiation est assurée par la modification de l'état d'oxydation de l'extincteur. Les systèmes d'essai visés sont utiles pour de nombreux formats d'essai, par exemple pour la confirmation de l'expression de l'enzyme agissant sur l'extincteur, et/ou la détection d'une espèce conjuguée