A METHOD OF REAL-TIME DETECTION OF NUCLEIC ACID SEQUENCES

A homogeneous method for detecting and/or quantifying specific nucleic acid sequences (DNA or RNA) in amplification or reverse transcription reactions, involving the use of fluorescently labeled forward and reverse primer pairs that produce a fluorescence resonance energy transfer signal when they are incorporated into the complementary strands of a double-stranded reaction product. The method includes selecting a target sequence and forming the members of the primer pair so that their fluorescent labels are in close proximity, so producing a detectable signal on receiving an energy stimulus. The method also involves selecting short nucleic acid target sequences, resulting in short amplification products in polymerase chain reactions characterized by relative short duration, high sensitivity and reduced secondary non-specific reactions. La présente invention concerne une technique homogène de détection et/ou de quantification de séquences d'acides aminés (ADN ou ARN) dans des réactions d'amplification ou de transcription inverse, qui utilisent des paires d'amorces avant et inverse marquées par fluorescence qui produisent un signal de transfert d'énergie par résonance de fluorescence lorsqu'elles sont incorporées dans des brins complémentaires d'un produit de réaction double brin. Cette technique consiste à sélectionner une séquence cible et à former les éléments de la paire d'amorce de façon que leurs étiquettes fluorescentes soient très proches, produisant ainsi un signal détectable à réception d'un stimulus d'énergie. Cette technique consiste aussi à sélectionner de courtes séquences d'acides nucléiques cible, donnant des produits d'amplification courts dans des réactions en chaîne de la polymérase caractérisées par une courte durée, une sensibilité élevée et des réactions non spécifiques secondaires réduites.