IMPROVED BACTERIAL OUTER MEMBRANE VESICLES

Existing methods of meningococcal OMV preparation involve the use of detergent during disruption of the bacterial membrane. According to the invention, membrane disruption is performed substantially in the absence of detergent. The resulting OMVs which retain important bacterial immunogenic components, particularly (i) the protective NspA surface protein, (ü) protein NMB2132 and (iii) protein NMB 1870.A Typical process involves the following steps: (a) treating bacterial cells in the substantial absence of detergent; (b) centrifuging the composition from step (a) to separate the outer membrane vesicles from treated cells and cell debris, and collecting the supernatant; (c) performing a high speed centrifugation of the supernatant from step (b) and collecting the outer membrane vesicles in a pellet; (d) re-dispersing the pellet from step (c) in a buffer; (e) performing a second high speed centrifugation in accordance with step (c), collecting the outer membrane vesicles in a pellet; (f) re-dispersing the pellet from step (e) in an aqueous medium. Les procédés existants pour la préparation de vésicules de membrane externe méningococciques impliquent l'utilisation de détergent lors de la rupture de la membrane bactérienne. Selon l'invention, cette rupture est réalisée pratiquement sans détergent. L'invention concerne également les vésicules de membrane externe obtenues, qui renferment des composants immunogènes bactériens importants, en particulier (i) la protéine de surface NspA protectrice, (ii) la protéine NMB2132 et (iii) la protéine NMB 1870. Un procédé typique selon l'invention comprend les étapes suivantes : (a) traitement des cellules bactériennes pratiquement sans détergent; (b) centrifugation de la composition obtenue à l'étape (a) pour séparer les vésicules de membrane externe des cellules traitées et des débris de cellules, et collecte du surnageant; (c) centrifugation à vitesse élevée du surnageant obtenu à l'étape (b) et collecte des vésicules de membrane extérieure dans une pastille; (d) redispersion de la pastille obtenue à l'étape (c) dans un tampon; (e) deuxième centrifugation à vitesse élevée selon l'étape (c), collecte des vésicules de membrane externe dans une pastille; (f) redispersion de la pastille obtenue à l'étape (e) dans un milieu aqueux.