METHOD FOR IDENTIFYING SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS (SNP) IN GENES WHICH METABOLIZE MEDICAMENTS AND TEST KIT FOR CARRYING OUT SAID METHOD

Die Erfindung betrifft ein vereinfachtes Verfahren zum Nachweis von SNP in Cytochrom P450 (CYP)-Genen des Menschen und ein Test Kit mit folgenden Komponenten: 1. Neu entwickelte synthetische Oligonukleotide, die geeignet sind, Genabschnitte in Genen des Arzneimittelmetabolismus mit Hilfe der "DNA Polymerase Chain Reaction" Technologie (PCR) isoformspezifisch (IS­-PCR) aus genomischer Leukozyten-DNA zu amplifizieren, 2. Komponenten, die es ermöglichen, einzelsträngig biotinierte IS-PCR Produkte auf Streptavidin beschichteten Mikrotiterplatten (SA-MTP) selektiv, thermostabil und einzelsträngig zu immobilisieren, 3. testoptimierte, allelspezifische, Fluoresceinisothiocyanat (FITC) markierte synthetische Oligonukleotide, die durch Hybridisierung, nachfolgende stringente Waschung und anschließende Detektion mittels Fluorometrie bzw. Photometrie eine sichere Genotypisierung der irrmobilisierten Amplifikationsprodukte (Amplikons) gewährleisten, oder alternativ dazu, 4. Streptavidin beschichtete Glasobjektträger (SA-Chip) auf denen biotinierte, isoformspezifische, synthetische Oligonukleotide immobilisiert sind, welche mit partiell einzelsträngigen PCR Produkten hybridisiert werden, die durch diskriminierende Verlängerung eines allelspezifischen, endständig FITC markierten Oligonukleotides mittels Taq DNA Polymerase erzeugt wurden und durch nachfolgende stringente Waschung und anschließende Detektion mittels Fluorometrie bzw. Photometrie eine sichere Genotypisierung der hybridisierten Amplikons gewährleisten. Im Unterschied zu den bekannten "high-throughput"-Verfahren ermöglicht es die hier beschriebene Erfindung, auch an wenigen Einzelpatienten bei niedrigen Personal- ­und Sachkosten die therapeutisch wichtigen Befunde zur individuellen Ausstattung mit den verschiedenen CYP Allelen zu erheben. The invention relates to a simplified method for identifying SNP in human cytochrome P450 (CYP) genes and to a test kit comprising the following components: 1. Novel synthetic oligonucleotides, suitable for amplifying gene segments in genes that metabolize medicaments, with the aid of isoform-specific (IS-PCR) DNA polymerase chain reaction technology (PCR), from genomic leukocyte DNA, 2. Components enabling the selective, thermostable, single-stranded immobilization of biotinated IS-PCR products on microplates coated with streptavidin (SA-MTP), 3. Test optimized, allele-specific, fluorescein isothiocyanate (FITC) labeled synthetic oligonucleotides, which guarantee a reliabl