CRYSTALLIZED GLUCOCORTICOID RECEPTOR LIGAND BINDING DOMAIN POLYPEPTIDE AND SCREENING METHODS EMPLOYING SAME

A method of modifying a test nuclear receptor (NR) polypeptide is disclosed. The method provides a test NR polypeptide sequence having a characteristic that is targeted for modification; aligning the test NR polypeptide sequence with at least one reference NR polypeptide sequence for which an X-ray structure is available; building a three-dimensional model for the test NR polypeptide usiing the three-dimensional coordinates of the X-ray structure(s) of at least one reference polypeptide and its sequence alignment with the test NR polypeptide sequence; examining the three-dimensional model of the test NR polypeptide sequence for characteristic differences with the reference polypeptide; and mutating at least one amino acid residue in the test NR polypeptide sequence at a characteristic difference, whereby the test NR polypeptide is modified. L'invention porte sur un procédé de modification d'un récepteur nucléaire d'essais (RNE) pouvant consister: à sélectionner une séquence de RNE présentant une caractéristique ciblée en vue de sa modification; à aligner ladite séquence de RNE avec au moins une séquence de récepteur nucléaire de référence (RNR) pour laquelle une structure obtenue par rayons X est disponible, et présentant une caractéristique souhaitée du RNE; à construire un modèle en 3D du RNE à l'aide des coordonnées en 3D de la structure obtenue par rayons X du RNR, et de l'alignement de ses séquences avec celle du RNE; à examiner le modèle en 3D du RNE pour y déceler les différences avec le RNR associés à la caractéristique souhaitée; à muter l'un au moins un résidu d'acides nucléiques de la séquence du RNE située au niveau d'une différence identifiée au-dessus d'un résidu associé à la caractéristique souhaitée, de manière à créer une modification du RNE. L'invention porte également: sur un récepteur de glucocorticoïdes (RG) isolé présentant une mutation d'un domaine de fixation de ligands modifiant la solubilité dudit domaine; sur un RG isolé ou ses parties fonctionnelles présentant une ou plusieurs mutations consistant à substituer un résidu d'acide nucléique hydrophobe à un résidu d'acide nucléique hydrophile, les mutations représentatives étant les substitutions F602S et F602D; sur l'expression du RG dans le E.coli; sur la structure cristalline en 3D résolue du domaine de fixation aux ligands du RG alpha ainsi que sur la forme cristalline dudit domaine; et sur des procédés d'élaboration de modulateurs de l'activité biologique du RG alpha et d'autre