METHOD FOR PRODUCING ACTIVE SERINE PROTEASES AND INACTIVE VARIANTS

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von biologisch aktiven Serinproteasen, isolierter Serinproteasen-Domänen und deren Aminosäure-Varianten in einem prokaryotischen Wirt, das charakterisiert ist durch N-terminale Addition einer Helfersequenz aus einem Dipeptid, geeignet...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Hauptverfasser:	BODE, WOLFRAM, PARRY, MARINA, A., A, WILHARM, ELKE, JENNE, DIETER, HUBER, ROBERT
Format:	Patent
Sprache:	eng ; fre ; ger
Schlagworte:	BEER BIOCHEMISTRY CHEMISTRY COMPOSITIONS THEREOF CULTURE MEDIA ENZYMOLOGY FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE HUMAN NECESSITIES HYGIENE MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE METALLURGY MICROBIOLOGY MICROORGANISMS OR ENZYMES MUTATION OR GENETIC ENGINEERING PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS SPIRITS VINEGAR WINE
Online-Zugang:	Volltext bestellen
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!

Beschreibung
Zusammenfassung:	Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von biologisch aktiven Serinproteasen, isolierter Serinproteasen-Domänen und deren Aminosäure-Varianten in einem prokaryotischen Wirt, das charakterisiert ist durch N-terminale Addition einer Helfersequenz aus einem Dipeptid, geeignet für den Abbau durch eine Dipeptidylaminopeptidase, Expression der Serinprotease(n) und/oder ihrer Fragmente mit N-terminaler Dipeptid-Helfersequenz, gegebenenfalls als Einschlusskörperchen, Renaturierung der exprimierten Proteine und Aktivierung der Serinprotease(n) und/oder Serinproteasen-Domänen durch Abspaltung der Helfersequenz durch eine Exopeptidase. The invention relates to a method for producing biologically active serine proteases, isolated serine protease domains and their amino-acid variants in a prokaryotic host. The method is characterised by an N-terminal addition of a helper sequence consisting of a dipeptide which is suitable for degradation by a dipeptidyl amino peptidase, by the expression of the serine protease(s) and/or their fragments containing the N-terminal dipeptide helper sequence, optionally as inclusion bodies, and by the renaturation of the expressed proteins and the activation of the serine protease(s) and/or serine protease domains by splitting-off the helper sequence using an exopeptidase. L'invention concerne un procédé de fabrication de sérine-protéases biologiquement actives, de domaines isolés de sérine-protéases et de leurs variantes aminoacides chez un hôte procaryote, caractérisé par addition N terminal d'une séquence auxiliaire d'un dipeptide appropriée pour la dégradation par une dipeptidylaminopeptidase, l'expression de la/ ou des sérine-protéases et/ou de leurs fragments avec des séquences auxiliaires dipeptidiques N terminal, éventuellement comme corps d'inclusion, et par renaturation de la protéine exprimée et activation de la/ ou des sérine-protéases et/ou des domaines de sérine-protéases par dédoublement de la séquence auxiliaire par une exopeptidase.