PROCESS FOR OBTAINING AND DETECTING GRAM-POSITIVE FLUORESCENT BACTERIA

The invention relates to a method for overproducing the green fluorescent protein (GFP). The gene gfp of Aequoreavictoria has been sub-cloned in large spectrum host plasmids, under the control of the promoter of the gene malM Streptococcus pneumoniae. Thereby, it was possible to obtain a strain of Streptococcus pneumoniae containing the gene gfp in its chromosome as well as the plasmids pLS70GFP, pLS69GFP, pLS1GPF and pLS1RGFP. The pneumococcic cells carrying said plasmids or carrying the chromosomic insertion synthesize GFP. pLS1GFP enables the constitutive expression of gfp in Lactococcus lactis. pLS1RGFP, which contains the gene malR, confers to S. pneumoniae a totally regulated expression of gfp.The chromosomic insertion and pLS70GFP enable the expression of gfp in monocopy or multicopy inducibly or constitutively depending on the pneumococcic strain which was used. The detection of carrier cells or of the quantitative expression of the protein GFP was carried out by using fluorescence microscopy or fluorescence spectrophotometry and immunodetection. Método para sobreproducir la proteína fluorescente verde (GFP). Se subclonó, en plásmidos de amplio espectro de huésped, el gen gfp de Aequorea victoria bajo el control del promotor del gen malM de Streptococcus pneumoniae. Así, se obtuvo una estirpe de S. pneumoniae conteniendo el gen gfp en su cromosoma y los plásmidos pLS70GFP, pLS69GFP, pLS1GFP y pLS1RGFP. Las células neumocócicas portadoras de dichos plásmidos o de la inserción cromosómica sintetizan GFP. Pls1gfp permite la expresión constitutiva de gfp en Lactococcus lactis. PLS1RGFP, que contiene el gen malR, confiere a S. pneumoniae una expresión totalmente regulada de gfp. La inserción cromosómica y pLS70GFP permiten la expresión de gfp en monocopia o multicopia de forma inducible o constitutiva dependiendo de la estirpe neumocócica empleada. La detección de las células portadoras o de la expresión cuantitativa de la proteína GFP se realizó utilizando microscopía de fluorescencia o espectrofotometría de fluorescencia e inmunodetección. L'invention concerne une méthode de surproduction de la protéine fluorescente verte (GFP). Le gène gfp Aequorea victoria est sous-cloné, dans des plasmides à large spectre d'hôte, sous le contrôle du promoteur du gène malM de Streptococcus pneumoniae. On obtient ainsi une souche de S. pneumoniae contenant le gène gfp dans son chromosome et les plasmides pLS70GFP, pLS69GFP, pLS1GFP et pLS1RGFP. Les cellules pneumococ