PROCESS FOR PRODUCTION OF RECOMBINANT HUMAN PROINSULIN C-PEPTIDE

The invention relates to the process for production of recombinant human c-peptide, comprising cultivation of strain producer Escherichia coli, destruction of bacterial cells by disintegration, separation of inclusion bodies containing hybrid protein, theirs solubilisation in buffer solution containing carbamide and dithiothreitol, renaturation and purification of hybrid protein, its degradation with trypsin and carboxypeptidase B, which is carried out simultaneously, wherein tryptic cleavage products are separated with chromatography on SP- sepharose, balanced with 0.03-0.1 M of ammonium-acetate buffer pH 3.6, containing 3 M of carbamide, eluated with linear gradient of potassium chloride from 0 to 0.5 M in initial buffer, with subsequent purifying and receiving of desired product. Изобретение относится к способу получения рекомбинантного с-пептида человека, который включает культивирование штамма-продуцента Escherichia coli, разрушение бактериальных клеток дезинтеграцией, отделение «телец включения», содержащих гибридный белок, их растворение в буфере, содержащем мочевину и дитиотреитол, ренатурацию и очищение ренатурированного гибридного белка, его расщепление трипсином и карбоксипептидазой В, обработку которыми осуществляют одновременно, при этом продукты трипсинолиза разделяют хроматографией на SP-сефарозе, уравновешенной 0,03-0,1 М аммоний-ацетатным буфером рН 3,6, содержащим 3М мочевины, элюируя линейным градиентом хлористого калия от 0 до 0,5 М в стартовом буфере, с последующим очищением и получением целевого продукта. Винахід належить до способу одержання рекомбінантного с-пептиду людини, що включає культивування штаму-продуцента Escherichia coli, руйнування бактеріальних клітин дезінтеграцією, відділення "тілець включення", що містять гібридний білок, їхнє розчинення в буфері, що містить сечовину і дитіотреїтол, ренатурацію й очищення ренатурованого гібридного білка, його розщеплення трипсином і карбоксипептидазою В, обробку якими здійснюють одночасно, при цьому продукти трипсинолізу розділяють хроматографією на SP-сефарозі, врівноваженій 0,03-0,1 М амоній-ацетатним буфером рН 3,6, що містить 3М сечовини, елююючи лінійним градієнтом хлористого калію від 0 до 0, 5 М в стартовому буфері, з наступним очищенням і одержанням цільового продукту.