METHOD FOR HYDROXYLATION OF α1- AND α2-CHAINS OF I TYPE HUMAN COLLAGEN IN TRANSGENIC PLANTS

A method for hydroxylation of (1- and (2-chains of I type human collagen in transgenic plants comprises forming of genetic constructions for agrobacterium plant transformation, containing genes of (- and (-subunits of prolyl-4-hydroxylase, production of transgenic plants and molecular genetic analysis of transformed plants, wherein genetic constructions for agrobacterium plant transformation are formed, containing genes of (- and (-subunits of human prolyl-4-hydroxylase ((-P4H and (-P4H) and sequences providing localization of synthesized proteins in apoplast or plastoma, under control of 35S promoter of cauliflower mosaic virus, nos-terminator, selective gene of phosphinotricyn-N-acetyltransferase (bar), providing plant resistance towards antibiotic phosphinotricyn, under control of nos-promotor; for genetic transformation with genes of (- and (-subunits of prolyl-4-hydroxylase Nicotiana benthamiana and N.excelsior plants are used, which are effective producers for subsequent transient expression of (1- and (2-chains of I type human collagen; for confirmation of transgens presence molecular-biological analysis is carried out by PCR with using of primers for amplification of gene fragments (-P4H, (-P4H and bar; produced transgenic plants N. benthamiana and N.excelsior expressing genes of (- and (-subunits of prolyl-4-hydroxylase, are used as adapted producers for transient expression of (1- and (2-chains of human collagen. Способ гидроксилирования (1- и (2-цепей коллагена человека первого типа в трансгенных растениях включает создание генетических конструкций для агробактериальной трансформации растений, содержащих гены (- и (-субъединиц пролил-4-гидроксилазы, получение трансгенных растений и молекулярно-генетический анализ трансформированных растений, при котором создают генетические конструкции для агробактериальной трансформации растений, содержащих гены (- та (-субъединиц пролил-4-гидроксилазы человека ((-Р4Н та (-P4H) и последовательности, обеспечивающие локализацию синтезированных белков в апопласте или пластоме, под контролем 35S промотора ВМЦК, nos-терминатора, селективный ген фосфинотрицин-N-ацетилтрансферазы (bar), который обеспечивает стойкость растений к антибиотику фосфинотрицину, под контролем nos-промотора; для генетической трансформации генами (- та (-субъединиц пролил-4-гидроксилазы используют растения Nicotiana benthamiana и N.excelsior, которые являются эффективными продуцентами для дальнейшей транзиентной экспрессии (1- и (2- цепей колл