METHOD FOR OBTAINING EQUIVALENT OF CORNEAL STROMA FOR KERATOPLASTY

The method for obtaining the equivalent of the corneal stroma for keratoplasty comprises the treatment of porcine cornea in the cell culture medium for decellularization. The treatment procedure is such as follows: The cornea is treated in a shaker with 0.5 % sodium dodecylsulfate at the temperature not more than 4 °C and sonicated for 5 minutes (CD 3800 A, 50 W). Then the sample is incubated with 0.1 % papaine (pH 6.5) for 2.5 hours at the temperature of 30 °C, washed in 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 6.5) three times for 5 minutes. Then the sample is again sonicated for 5 minutes (CD 3800 A, 50 W) and treated with 0.5 % sodium dodecylsulfate twice for 3 hours, washed in 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 6.5) three times for 5 minutes. Then the sample is again sonicated for 5 minutes (CD 3800 A, 50 W) and washed in 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 6.5) five times for 5 minutes. The mixture is centrifuged at 3000 g for 15 minutes with decantation three times and transferred into the storage medium (2 % polyvinyl pyrrolidone) at the temperature of 0 °C. Способ получения эквивалента стромы роговицы для кератопластики, по которому оболочку роговицы, полученную из удаленных глаз свиней, размещают в среде для культивирования ткани. Проводят децелюлляризацию следующим образом: обрабатывают 0,5 % раствором додецилсульфата натрия в условиях постоянного встряхивания при температуре не выше 4 °C, затем обрабатывают ультразвуком (CD 3800 А, 50 Вт) в течение 5 минут. Осуществляют инкубацию в присутствии ферментного 0,1 % раствора папаина (рН 6,5) в течение 2,5 часов при 30 °C, промывают в калий-фосфатном 0,1 М буфере (рН 6,5) трехкратно по 5 мин. Обрабатывают ультразвуком (CD 3800 А, 50 Вт) в течение 5 минут, снова обрабатывают 0,5 % раствором додецилсульфата натрия дважды в течение 3 часов, промывают в калий-фосфатном 0,1 М буфере (рН 6,5) трехкратно по 5 минут. Опять обрабатывают ультразвуком (CD 3 800 А, 50 Вт) в течение 5 минут, промывают в калий-фосфатном буфере (рН 6,5) пятикратно по 5 минут, центрифугируют при 3000 g 15 минут с декантацией трехкратно и переносят в среду для хранения - в 2% раствор поливинилпирролидона при температуре 0 °C. Спосіб отримання еквівалента строми рогівки для кератопластики, за яким рогівкову оболонку, отриману з видалених очей свиней, розміщують в середовищі для культивування тканини. Проводять децелюляризацію наступним чином: обробляють 0,5 % розчином додецилсульфату натрію в умовах постійного струшування при температу