METHOD OF PREPARING MELIODOSIS PATHOGEN EXOPROTEASES

FIELD: medicine, biochemistry, enzymology. SUBSTANCE: method involves the use of 2-days broth culture of virulent strain P. pseudomallei 57576. Enzyme purification involves protein precipitation with ammonium sulfate (80% saturation), removing inert proteins by gel-filtration on Sephadex G-25 and G-100 and further purification by ion-exchange chromatography on DEAE-Sephadex A-50 at pH = 8.2 and carboxymethyl-Sephadex C-50 at pH = 5.2. Purification of exoprotease by this method is increased by 4-10-fold as compared with prototype. Enzyme shows high activity and substrate specificity. Enzyme can be used for preparing test-system for detection and investigation of meliodosis microbe. EFFECT: improved method of enzyme preparing, enhanced purity. Изобретение относится к медицине и касается получения высокоочищенных протеолитических ферментов P. pseudomallei пригодных для изучения биологии мелиоидозного микроба, получение диагностических тест-систем для их детекции. Изобретение позволяет повысить степень очистки ферментов с сохранением их нативных свойств. Сущность способа заключается в том, что для выделения ферментов предложено использовать 2-х суточную бульонную культуру вирулентного штамма P. Pseudomallei 57576, осаждение белков при 80% насыщения сульфатом аммония, отделение балластных белков методом гель-хроматографии на сефадексе G-25 и G-100, дальнейшую очистку ферментов методами ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-сефадексе А-50 при рН 8,2 и КМ сефадексе К-50 при рН 5,8. Полученные предложенным способом экзопротеазы превосходят по степени очистки в 4-10 раз по сравнению с прототипом и обладают высокой ферментативной активностью и субстратной специфичностью.