METHOD OF PREPARING THE HIGHLY PURIFIED MONOCOMPONENT INSULIN

FIELD: biotechnology, biochemistry, endocrinology. SUBSTANCE: method involves purification of sodium-insulin by chromatography and involves chromatography on macroporous sulfocationite -2 , isolation of insulin from eluates by isoelectric precipitation, gel-filtration on Sephadex G-50 and insulin elution with 1 M acetic acid followed by chromatography of insulin in monopeak fraction on column with anion-exchange silica gel PAE-300. Insulin is eluted from the latter column at exponential gradient of NaCl concentration under the following dependence: C = K x ewhere: C - NaCl concentration in eluting solution, M/l; K - coefficient of gradient steepness, K = 0.0041-0.011; e - natural logarithm base, e = 2.71828...; N - ratio of eluent volume to packing column volume. Highly purified insulin is isolated from eluate as crystalline zinc-insulin. Obtained insulin contains 98.5% monofraction (not less), 0.5% deamidoinsulin (not above), 1.0% unidentified impurities (not above, by HPLC method), 10 ppm proinsulin and its derivatives (not above). Yield is 55-65% of the parent sodium-insulin. EFFECT: enhanced quality, increased yield of the end product. Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно к способу получения высокоочищенного монокомпонентного инсулина животного происхождения, применяемого для лечения сахарного диабета. Цель: повышение качества и выхода монокомпонентного инсулина. Способ заключается в том, что натрий инсулин с содержанием монофракии не менее 85% растворяют в 0,018-0,022 М фосфатном буфер при pH - 6,7-6,8 и подают в хроматографическую колонну, предварительно заполненную уравновешенным в том же буфере макропористым сульфокатионитом КУ - 23И с диаметром частиц от 200 до 300 мкм. Элюируют инсулин при комнатной температуре 0,018-0,022 М фосфатным буфером линейным в течение 2-3 объемов насадки в колонне градиентом по значению pH: от pH= 6,7-6,8 до pH=7,9-8,0. Из полученного элюата выделяют инсулин изоэлектрическим осаждением. Полученный после катионообменной хроматографии на КУ-23И инсулин растворяют в 1 М уксусной кислоте и подают в хроматографическую колонну, предварительно заполненную сефадексом G-50 sf фирмы Pharmacia, уравновешенным в 1 м уксусной кислоте и термостатированную при температуре от 4 до 6С. При этой же температуре проводят элюирование инсулина 1 М уксусной кислотой со скоростью от 5 до 13 мл/см* час . Часть элюата,которая содержит инсулин и которая элюируется в интервале от 6-0,7 до 0,9-1,0 объема насадки в колонне, н