PROCESS FOR PREPARING RIBONUCLEOSIDE-5'-PHOSPHATES

FIELD: medicine, biochemistry and biology. SUBSTANCE: ribonucleoside-5'-phosphates are biologically active agents. 5'-mono-, di- and triphosphates of adenosine, uridine and cyclidine are prepared by biophosphorylation of ribonucleosides with enzymic system of yeast in the presence of inorganic phosphates, potassium and magnesium ions, carbohydrates and toluene. Reaction is carried out by directly monitoring quantitative proportions of reaction components. The reaction is completed by adjusting pH to 4.5-4.8 and separating yeast slurry. Heat treatment is then carried out at 3.0-5.0 at 45-75 C for 20-60 minutes and the resulting precipitate is further separated. Reaction products are recovered from filtrate with highly basic anionite by fraction elution: mono-and diphosphates are eluted with 0.02 N sodium chloride solution in 0.01N hydrochloric acid, and triphosphates are eluted with 0.5 N sodium chloride solution in 0.02 N hydrochloric acid. Reaction products are recovered by precipitation from eluent into excess of water-miscible organic solvent selected from acetone and ethanol and cooled to -8 to -12 C. Aqueous solutions of the recovered reaction products are then deionized either by treating the solution with sulfocationite in H-form or by adding trilon at concentration of 0.001-1.0%. The desired agent is recovered by precipitation of the agent from the deionized solution into excess of water- miscible organic solvent. EFFECT: improved properties of the title compounds. Изобретение относится к получению биологически активных веществ, конкретно рибонуклеозид-5'-фосфатов, находящих использование в медицине, биохимии, биологии. 5'-моно-, ди- и трифосфаты аденозина, уридина и цитидина получают путем биофосфорилирования рибонуклеозидов ферментной системой дрожжей в присутствии неорганических фосфатов, источников ионов калия и магния, углеводов и толуола. Реакцию проводят при прямом контроле за количественными соотношениями компонентов реакции. Реакцию завершают подкислением до рН 4,5 - 4,8, отделяют дрожжевой шлам. Затем проводят термообработку при рН 3,0 - 5,0 при 45 - 75°С в течение 20 - 60 мин и дополнительно отделяют образовавшийся осадок. Из фильтрата с помощью сильноосновного анионита выделяют продукты реакции фракционной элюцией: моно- и дифосфаты элюируют раствором 0,02 н хлористого натрия в 0,01 н соляной кислоте, трифосфаты элюируют раствором 0,5 н хлористого натрия в 0,02 н соляной кислоте. Из элюента выделяют продукты реакции осаждением в избыток