TEST SYSTEM FOR GENOME DETECTION OF ROTAVIRUS AGENT OF TYPE A IN AGRICULTURAL ANIMALS BY MEANS OF MULTIPLEX POLYMERASE CHAIN REACTION WITH FLUORESCENT DETECTION IN REAL TIME

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to the field of biotechnology. Described is a test system for detecting the genome of the rotavirus type A agent in agricultural animals using a multiplex polymerase chain reaction with fluorescent detection in real time. Test system comprises a buffer for conducting a polymerase chain reaction, a mixture for carrying out thereof, consisting of deoxynucleoside triphosphates, primers and fluorescent probes specific for rotavirus A, mixture of enzymes from DNA polymerase with antibodies inhibiting enzyme activity, TAQ POLYMERASE and reverse transcriptase MMLV REVERSE TRANSCRIPTASE. Mixture of recombinant plasmid DNA containing a RVA virus genome fragment and a bacteriophage MS2 genome fragment contains the following nucleotide sequences: RVF5 5'-ATTTCAGTTGATGAGACCA-3'; forward primer; RVR6 5'-CAATTCTAAGCGTGAGTCC-3' a reverse primer; probe RVP FAM - 5'-AATATGACACCAGCGGTA-3' - BHQ1,MS2F, 5'-TGGCACTACCCCTCTCCGTATTCAC-3' - forward primer; MS2R, 5'-GTACGGGCGACCCCACGATGAC-3' - a reverse primer; MS2P probe, Cy5 5'-CACATCGATAGATCAAGGTGCCTACAAGC-3' BHQ2.EFFECT: invention extends the range of agents for detecting the genome of the rotavirus type A agent in agricultural animals.1 cl, 4 tbl, 1 ex Изобретение относится к области биотехнологии. Описана тест-система для обнаружения генома возбудителя ротовируса типа А у сельскохозяйственных животных с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Тест-система включает в себя буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящую из дезоксинуклеозидтрифосфатов, праймеров и флуоресцентных зондов, специфичных для ротавируса А, смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE и обратной транскриптазы MMLV REVERSE TRANSCRIPTASE. Смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома вируса RVA и фрагмент генома бактериофага MS2, содержит следующие нуклеотидные последовательности:RVF5 5'-ATTTCAGTTGATGAGACCA-3'; прямой праймер;RVR6 5'-CAATTCTAAGCGTGAGTCC-3' обратный праймер;зонд RVP FAM - 5'-AATATGACACCAGCGGTA-3' - BHQ1,MS2F, 5'-TGGCACTACCCCTCTCCGTATTCAC-3' - прямой праймер;MS2R, 5'-GTACGGGCGACCCCACGATGAC-3' - обратный праймер;зонд MS2P, Су5 5'-CACATCGATAGATCAAGGTGCCTACAAGC-3' BHQ2.Изобретение расширяет арсенал средств для обнаружения генома возбудителя ротовируса типа А у сельскохозяйственных животных. 4 табл., 1 пр.