TEST SYSTEM FOR DETECTING CORONAVIRUS INFECTION PATHOGEN GENOME IN CATTLE BY MEANS OF MULTIPLEX POLYMERASE CHAIN REACTION WITH FLUORESCENT DETECTION IN REAL TIME

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: described is a test system for detecting the coronavirus infection pathogen genome in cattle using a multiplex polymerase chain reaction (PCR) with real-time fluorescent detection. Test system comprises a PCR buffer, a mixture for its carrying out, consisting of deoxynucleoside triphosphates, primers and fluorescent probes specific for coronavirus A and for an internal control sample; mixture of enzymes from DNA polymerase with antibodies inhibiting enzyme activity, TAQ POLYMERASE and reverse transcriptase MMLV REVERSE TRANSCRIPTASE. Mixture of recombinant plasmid DNA containing a fragment of BCoV virus genome and a fragment of bacteriophage MS2 genome contains the following nucleotide sequences: BCoVF 5'-GATCAAATTGCTAGT-3' - forward primer; BCoVR 5'-CAGTCTGCTTAGTTA-3' - reverse primer; BCoVP 5'-FAM-GGATGCCACTAAGCCA-3' - BHQ1 - probe; MS2F 5'-TGGCACTACCCCTCTCCGTATTCAC-3' - forward primer; MS2R, 5'-GTACGGGCGACCCCACGATGAC-3' - reverse primer; MS2P Cy5 5'-CACATCGATAGATCAAGGTGCCTACAAGC-3 BHQ' is a probe.EFFECT: invention extends the range of means for detecting coronavirus infection genome in cattle.1 cl, 4 tbl, 1 ex Изобретение относится к области биотехнологии. Описана тест-система для обнаружения генома возбудителя коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота при помощи мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в реальном времени. Тест-система включает буфер для проведения ПЦР, смесь для ее проведения, состоящая из дезоксинуклеозидтрифосфатов, праймеров и флуоресцентных зондов, специфичных для коронавируса А и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE и обратной транскриптазы MMLV REVERSE TRANSCRIPTASE. Смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома вируса BCoV и фрагмент генома бактериофага MS2 содержит следующие нуклеотидные последовательности: BCoVF 5'-GATCAAATTGCTAGT-3' - прямой праймер; BCoVR 5'-CAGTCTGCTTAGTTA-3' - обратный праймер; BCoVP 5'-FAM-GGATGCCACTAAGCCA-3' - BHQ1 - зонд; MS2F 5'-TGGCACTACCCCTCTCCGTATTCAC-3' - прямой праймер; MS2R, 5'-GTACGGGCGACCCCACGATGAC-3' - обратный праймер; MS2P Су5 5'-CACATCGATAGATCAAGGTGCCTACAAGC-3 BHQ' - зонд. Изобретение расширяет арсенал средств для обнаружения генома коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота. 4 табл., 1 пр.