METHOD FOR MODELING BIOFILMS FORMED BY VIBRIO CHOLERAE 01 SEROGROUP ON CHITIN SURFACE

FIELD: microbiology.SUBSTANCE: invention relates to medical microbiology. Described is a method for simulating biofilms formed by Vibrio cholerae 01 serogroups on chitin surface. Method involves using chitin to form a biofilm formed by V. cholerae cells, followed by incubation and analysis of the results in PCR. Chitin used is Astacus astacus river cancer plates in amount of 10-15 pieces and size of 0.3×0.3 cm, which are placed into a bottle with capacity of 100 ml, containing 30 ml of tailed river water. Bottle is autoclaved for 10 minutes at 120 °C, and after cooling, a suspension of Vibrio cholerae 01 serogroup cultures is introduced into the bottle to a final concentration of 10 m.c./ml. Incubation is performed at 10 °C and 28 °C. Analysis of the results of formation of both simple and complex V. cholerae biofilms is carried out in PCR using primers to INDEL-locus 1699: VC1699-1 GCTTAGCTATTTTTGGGTATAGGTT, VC1699-2 CGTTCATTTTTACTCAAACAGTCA. Atoxigenic strains of ctx-tcpA- form an amplicon with mass of 132 base pairs, and toxigenic strains ctx+tcpA+ form an amplicon with weight of 116 base pairs.EFFECT: thus confirming the presence of toxigenic strain cells in a complex biofilm and the ability to colonize the surface of chitin.4 cl, 3 dwg, 4 ex Изобретение относится к медицинской микробиологии. Описан способ моделирования биопленок, формируемых Vibrio cholerae 01 серогруппы на поверхности хитина. Способ включает использование хитина для формирования биопленки, образуемой клетками V. cholerae, с последующей инкубацией и анализом результатов в ПЦР. В качестве хитина используют пластины речного рака Astacus astacus в количестве 10-15 штук и размером 0,3×0,3 см, которые размещают во флакон емкостью 100 мл, содержащий 30 мл отстоенной речной воды. Флакон автоклавируют 10 минут при 120°С, а после охлаждения во флакон вносят взвесь культур Vibrio cholerae 01 серогруппы до конечной концентрации 10м.к./мл. Инкубирование проводят при 10°С и 28°С. Анализ результатов образования как простых, так и сложных биопленок V. cholerae проводят в ПЦР с использованием праймеров к INDEL-локусу 1699:VC1699-1 GCTTAGCTATTTTTGGGTATAGGTT,VC1699-2 CGTTCATTTTTACTCAAACAGTCA.При этом атоксигенные штаммы ctx- tcpA- формируют ампликон массой 132 п.о., а токсигенные штаммы ctx+tcpA+ образуют ампликон массой 116 п.о. Таким образом, подтверждают присутствие клеток токсигенного штамма в составе сложной биопленки и способность колонизировать поверхность хитина. 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 пр.