METHOD FOR OBTAINING OF RECOMBINANT EXOPROTEIN OF A PSEUDOMONAS AERUGINOSA

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: method includes obtaining of expression plasmid vector pET-rEPA (SEQ NO: 3), containing a promotor sequence of T7 bacteriophage DNA and DNA sequences encoding the N-end region of protein product of translation enhancer (MASMT amino-acid sequence), six histidine residues, site of SUMO protease cleavage and a sequence (SEQ NO: 1) optimized for broadcasting in E. coli encoding recombinant rEPA protein (SEQ NO: 2). Recombinant chimeric precursor protein in the heterological expression system in electro-competent cells of E. coli BL21 (DE3), transformed by the plasmid vector pET-rEPA to obtain a E. coli BL-rEPA strain at 37°C to ensure the maximum amount of accumulation of precursor protein in the soluble fraction. Lysis of the bacterial mass is carried out in the presence of 4% Triton X-100 to preserve the precursor protein in a soluble form. The precursor protein is isolated by metal chelate chromatography on Talon sorbent charged with Coions, followed by hexahistidine and SUMO peptide cleavage with SUMO protease from the polypeptide. The cleaved recombinant protein rEPA is subject to finish purification by anion-exchange chromatography on DEAE-Sepharose sorbent and gel-filtration chromatography on a Superdex 200-filled column, with translation to the target buffer with pH of 7.5, obtaining the recombinant rEPA protein.EFFECT: production of protein in high yield.4 dwg, 4 ex Предложен способ получения рекомбинантного экзопротеина А P. aeruginosa (rEPA). Способ включает получение экспрессионного плазмидного вектора pET-rEPA (SEQ NO: 3), содержащего промоторную последовательность ДНК бактериофага Т7 и последовательности ДНК, кодирующие N-концевую область белкового продукта энхансера трансляции (аминокислотная последовательность MASMT), шесть остатков гистидина, сайт расщепления протеазой SUMO и оптимизированную для трансляции в Е. coli последовательность (SEQ NO: 1), кодирующую рекомбинантный белок rEPA (SEQ NO: 2). Осуществляют продукцию рекомбинантного химерного белка-предшественника в гетерологичной системе экспрессии в электрокомпетентных клетках Е. coli BL21(DE3), трансформированных плазмидным вектором pET-rEPA с получением штамма Е. coli BL-rEPA, при 37°С для обеспечения накопления максимального количества белка-предшественника в растворимой фракции. Проводят лизис бактериальной массы в присутствии 4% Triton Х-100 для сохранения белка-предшественника в растворимой форме. Выделяют белок предшественник с помощью металл-хелатно