METHOD FOR PREPARING ANTINEOPLASTIC DRUG AGAINST BONE METASTASES IN FORM OF CONJUGATE OF PROTEIN-CYTOKINE AND AMINOBISPHOSPHONATE

FIELD: pharmacology.SUBSTANCE: conjugation reaction of aminobisphosphonate and the antineoplastic component using a cross-linker is carried out. Then the conjugation product is separated from the unbounded components of the reaction mixture. The human TNF-alpha protein is used as the antineoplastic component, alendronic acid is used as aminobisphosphonate, glutaraldehyde, or water-soluble N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide, or sulfosuccinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate(Sulfo-SCMM) is used as the cross-linker. Prior to conducting the conjugation reaction, alendronic acid or the TNF-alpha protein is pre-adsorbed on an insoluble hydroxylapatite carrier. The component adsorbed on the carrier is activated with the cross-linker, followed by washing of the mentioned agent. After the conjugate is formed on the carrier, the unbounded TNF-alpha protein is eluted first, and then the resulting conjugate of alendronic acid with the TNF-alpha protein is eluted. The resulting conjugate of the TNF-alpha protein with alendronic acid have a stoichiometric ratio of 1:1.EFFECT: invention allows to synthesise a conjugate of a human TNF-alpha protein with alendronic acid with controlled stoichiometry, which preserves the antineoplastic activity of TNF-alpha and is directed against metastatic tumour of bone tissue.4 cl, 11 dwg, 10 ex, 1 tbl Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения противоопухолевого средства против метастазов костей в виде конъюгата белка-цитокина и аминобисфосфоната. Для этого проводят реакцию конъюгации аминобисфосфоната и противоопухолевого компонента с использованием сшивающего агента. Затем отделяют продукт конъюгации от несвязавшихся компонентов реакционной смеси. При этом в качестве противоопухолевого компонента используют белок ФНО-альфа человека, в качестве аминобисфосфоната алендроновую кислоту, в качестве сшивающего агента используют глутаровый альдегид, или водорастворимый N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид, или сульфосукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (Sulfo-SCMM). Перед проведением реакции конъюгации алендроновую кислоту или белок ФНО-альфа предварительно адсорбируют на нерастворимом носителе гидроксилапатите. Компонент, адсорбированный на носителе, активируют сшивающим агентом с последующей отмывкой указанного агента. После образования конъюгата на носителе вначале элюируют несвязавшийся белок ФНО-альфа, а затем полученный конъюгат алендроновой кисло