METHOD OF DIRECTED DEPOSIT OF OLIGONUCLEOTID LIBRARIES FOR THE REDUCTION OF NON-SPECIFIC ADSORPTION IN THE SOLID-PHASE SELECTION OF APTAMERS ON THE BASIS OF NUCLEIC ACIDS

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: method involves the preparation of the oligonucleotide combinatorial library of 1015 molecules for selection and breeding oligonucleotide library to a concentration of 1015 molecules per 1 ml denatured oligonucleotides at 90°C for 10 minutes and annealed oligonucleotides at 37°C. Binding of glutathione-S-transferase or streptavidin at 1 mg prepared from the original pool of oligonucleotide library in a buffer containing 20 mM Tris-HCl pH 7.4, 50 mM NaCl and 5 mM EDTA, and separation of the resulting mixture of nucleic acid/target-protein by gel filtration chromatography into fractions.EFFECT: invention allows to eliminate from oligonucleotide pool maximum possible number of affinity to the molecular predetermined target, and repetition of rounds of such selection warrants in final pool of molecules oligonucleotides having significant for further use affinity for the target, the invention may be applied to obtain vyskoaffine aptamers useful in biomedical field.7 dwg, 7 ex Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа направленного истощения олигонуклеотидных библиотек в отношении водорастворимых белковых мишеней глутатион-S-трансферазы и стрептавидина. Представленный способ включает подготовку комбинаторной олигонуклеотидной библиотеки в количестве 10молекул к отбору, разведение олигонуклеотидов библиотеки до концентрации 10молекул на 1 мл, денатурацию олигонуклеотидов при 90°С в течение 10 минут и отжиг олигонуклеотидов при 37°С. Связывание глутатион-S-трансферазы или стрептавидина в количестве 1 мг с подготовленным пулом исходной олигонуклеотидной библиотеки в буферном растворе, содержащем 20 мМ Tris-HCl рН 7,4, 50 мМ NaCl и 5 мМ EDTA, и разделение полученной смеси нуклеиновая кислота/белок-мишень гель-фильтрационной хроматографией на фракции. Изобретение позволяет элиминировать из пула олигонуклеотидов максимально возможное количество аффинных к заданной мишени молекул, а повторение раундов такой селекции гарантирует отсутствие в финальном пуле молекул олигонуклеотидов, имеющих значимую для дальнейшего применения аффинность к мишени. Изобретение может быть применено для получения выскоаффинных аптамеров, применимых в области биомедицины. 7 ил., 7 пр.